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- 文献和实验
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负20度
- 保质期:
2年
- 英文名:
pMD-19T-CD20
- 库存:
100
- 供应商:
kelei-bio
- 规格:
20μl
详细请登录网站查询 www.kelei-biology.com.或发邮件至1722105945@qq.com,(QQ:1722105945)我们会第一时间给您回复。
柯雷生物拥有数万种质粒,菌种,基因,细胞株,试剂盒等科研资源,还提供基因合成,质粒改造,载体构建和蛋白表达等精品实验服务
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文献和实验按照TaKaRa的说明书,我用了Cool Start法,就是所有操作和试剂都是放在冰上进行的,据说能够减少非特异性。我当时担心目的基因量不够,所以P了两管,分到四个孔跑胶回收的。胶回收用的是OMEGA的试剂盒。 切胶回收之后测得目的片段浓度大概为20 ng/ul。按照TaKaRa的pMD18T说明书的要求,pMD18T需要加入1 ul,而目的片段需要0.1 pmol-0.3 pmol,换算一下,需要的目的片段的量大概为0.1*1800*325=58500 pg=58.5 ng到0.3*1800
或者进入 google,点击」图片搜索」,直接查找图谱。 5. 寒梅砺剑阁(热心生物人整理的) http://yoou.bokee.com/5757561.html 6. 其他的一些核酸数据库 方法三:一些重要试剂公司网页 这些网站除了得到质粒图谱等信息,还可以得到关于质粒使用方面的信息,现在很多质粒,特别是应用比较广泛的质粒都一些公司商业化的质粒,基本是由一个质粒你就会联想到一个公司的名字。 比如简单的,克隆载体 pMD18-T
18/19T然后再切下来,因为可以保存引物位点(当然引物不能含酶切位点),切得是MCS提供的位点;再后来想了一个更好的办法是用M13-47和RMV引物括了再切(这两个引物在MCS以外),片断浓度大,不需提质粒,没有RNA干扰。注意不是pMD simple而是pMD,前者是没有酶切位点的。 4:连接:这是最痛心的事情,前一阵一个月没连上一个,最近两天连了三个。自己认为片断浓度问题倒是好说,但是必须保证片断的纯度。那一个月迷信TAKARA片断回收试剂盒,方便,但是里面的醇和RNA并没有除净;切胶回收就连上
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