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- Xybio
- 上海
- P0451
- 2025年07月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pMD19-Control
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pMD19-Control大肠克隆对照质粒
别称: pMD19-Control
启动子：Lac/lac promoter
复制子: pUC
质粒标签：LacZ
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
| 5'测序引物: | M13R:CAGGAAACAGCTATGACC |
|---|---|
| 3'测序引物: | M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT |
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：空载体
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pMD19-Control质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0626/pEGFP-CCL2人源基因质粒 |
| P0627/pEGFP-IL8人源基因质粒 |
| P0638/pEGFP-Linker-IL17A人源基因质粒 |
| P0640/pEGFP-CXCL1人源基因质粒 |
| P0641/pEGFP-TGFB1人源基因质粒 |
| P0613/pEGFP-MD2①人源基因质粒 |
| P0614/pEGFP-MD2②人源基因质粒 |
| P0615/pEGFP-IFITM3人源基因质粒 |
| P0633/pEGFP-IL17A人源基因质粒 |
| P0634/pEGFP-MMP9（2同义突变）人源基因质粒 |
| P0635/pEGFP-Timp1人源基因质粒 |
| P0577/pEGFP-IL1A人源基因质粒 |
| P0578/pEGFP-IL12B人源基因质粒 |
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文献和实验编码区的基因片段，其由5'末端的stat密码子（ATG）和3'末端的终止密码子（TAA，TAG或TGA）结合。然后将目的基因片段插入pMD18-T载体中以构建重组质粒，通过DNA测序鉴定。用指定的酶消化重组pMD18-T质粒，并通过以下方案将检索到的目的DNA片段亚克隆到pET-32α（+）载体中以产生重组表达载体。将约129bp的TBO基因片段插入pET-32α（+）载体（5900bp）用相同的限制酶在37℃消化pET-32α（+）载体和重组pMD18-T载体1小时，然后通过在65℃温育10分钟
1. 质粒载体构建不成功（目的片段和载体不能成功连接）的常见原因分析 ①DNA 片段纯度差：体系中的杂质会降低连接效率，如果使用不纯化直接连接的方法一直无法成功构建载体，可以考虑进行纯化后再进行连接； ②目的片段和载体片段使用比例悬殊，或者用量过多或过少：目的片段和载体的摩尔比需要控制在一定范围之内，否则会影响连接效率，具体比例可以草靠连接酶说明书； ③连接条件不当：比如连接时间不足、温度不合适、酶失活等，可以通过设置对照组来排查原因； ④引物设计问题：比如通过无缝克隆的方式进行连接，同源
或者进入 google，点击」图片搜索」，直接查找图谱。 5. 寒梅砺剑阁（热心生物人整理的） http://yoou.bokee.com/5757561.html 6. 其他的一些核酸数据库 方法三：一些重要试剂公司网页 这些网站除了得到质粒图谱等信息，还可以得到关于质粒使用方面的信息，现在很多质粒，特别是应用比较广泛的质粒都一些公司商业化的质粒，基本是由一个质粒你就会联想到一个公司的名字。 比如简单的，克隆载体 pMD18-T
