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- KL-J-0108
- 2025年07月15日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20度
- 规格：
300UL
基因型： F- gyrA462 endA1 glnV44 Δ(sr1-recA) mcrB mrr hsdS20(rB-, mB-) ara14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(Smr) xyl5 Δleu mtl1 基本信息： 抗性：Str 培养基：LB 菌株类别：大肠杆菌 培养条件：37℃，有氧，LB 质粒转化：42℃热激 保存方式：20%甘油，-20℃ 基本应用：用于基因克隆 备注： 菌株简介： DB3.1属于大肠杆菌克隆型菌种，DB3.1大肠杆菌菌株基因组中含有 gyrA462 基因，赋予其对λ嗜菌体的ccdB毒性基因的抗性，特别适用于构建或扩繁含有ccdB基因的质粒载体（例如GATEWAY System Vector) ，此菌株具有链霉素抗性。DB3.1需要在37℃有氧的条件下培养，可以使用20%的甘油在-80℃进行保种。用此大肠杆菌转化质粒，可采用42℃热激，进行转化。 DB3.1制备感受态的时候请先用链霉素筛选菌种，在含有链霉素素抗生素的培养皿上四区划线该菌株，挑取单菌落培养，然后再进行感受态制备操作。 DB3.1 Competent Cells have been prepared by apatented modification of the procedure of Hanahan (1). These cells contain the gyrA462 allele which renders the strain resistant to the toxic effects of the ccdB gene (2). DB3.1 Competent Cells can be used for propagating plasmids containing the ccdB gene such as GATEWAY System vectors or for constructing new plasmids containing the ccdB gene.
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文献和实验相关实验
短片段（5kb 以内）的序列克隆成功率。对于提高大片段克隆的成功率，可以从以下几方面考虑： ①选择合适的克隆载体，例如 pCC1-Brick 等适合装载大片段的载体； ②选择合适的克隆方法，通常无缝克隆技术如 Gibson 组装或者 Golden Gate 克隆对于大片段的组装效率更高； ③选择合适的纯化方式，纯化目的基因片段和线性化载体片段后再使用，并且注意两者的使用比例； ④选择合适的大肠杆菌感受态细胞，例如 stbl3，JM109 等； ⑤挑选单克隆菌落时需要注意，成功重组大片段的阳性单克隆菌
。从大肠杆菌里提取原始质粒模板一般都被甲基化的，DpnI 可以将原始野生型质粒模板进行酶切, 而质粒扩增的突变型质粒不能被酶切从而保留下来。4. 最后，将酶切后产物转化入大肠杆菌，通过涂板挑取单克隆菌落后，摇菌测序，这样就可以得到突变基因的质粒啦。
。从大肠杆菌里提取原始质粒模板一般都被甲基化的，DpnI 可以将原始野生型质粒模板进行酶切, 而质粒扩增的突变型质粒不能被酶切从而保留下来。4. 最后，将酶切后产物转化入大肠杆菌，通过涂板挑取单克隆菌落后，摇菌测序，这样就可以得到突变基因的质粒啦。
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DB3.1大肠杆菌克隆菌
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