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检测16S/18S/ITS等序列
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上海英拜
二、生物信息分析
1. 原始数据整理、过滤及质量评估
2. OTU生成和注释
3. 基于物种丰度分析:
♦稀释曲线
♦丰度分布曲线
♦Alpha多样性分析
♦物种丰度差异分析
4. 基于群落结构分析:
♦单样品物种分布饼图
♦多样品物种分布柱图
♦含进化关系的物种丰度
♦Beta多样性分析
5. 根据客户需求进行个性化分析
三、结果展示
四、样品要求
1、样品采集:样品采集条件的一致是最为重要的环节,严格按照采样标准采样,采样后立即封存样品冷冻保存。
2、样品DNA:环境因素异常复杂,许多物质或抑制因子影响后续PCR、测序文库构建和序列测定,常规提取方法不一定适合,建议采用专用试剂盒提取。提供浓度≥20 ng/μl,总量≥500 ng的基因组DNA,并确保电泳检测无明显RNA条带,基因组条带清晰、完整;基因组DNA完全无降解;提供DNA电泳检测照片,用自封袋密封后随样品一起送样。组织样品>1.5 g。
3、样品保存期间切忌反复冻融。
4、送样管务必标清样品编号,管口使用Parafilm膜密封。
五、研究案例
鸡(宿主)与其肠道微生物共生代谢
背景:大量人体肠道微生物宏基因组研究表明,许多慢性疾病都与肠道微生物的组成与功能相关。然而由于宿主遗传背景、生理条件和外界环境等因素的制约,迄今为止,人类对于自身机体与肠道微生物之间的关系并不十分清楚。
目的:该研究以鸡的双向选择家系为研究对象,根据样本的56日龄体重进行了54代选择,并选取其中体重差异达到10倍的个体,采用高通量测序技术对双向选择家系个体的肠道微生物组成和分布进行了检测分析。
结果:研究结果表明在同一环境条件下肠道微生物的组成会随着宿主基因型的改变而发生相应变化,同一基因型、不同性别的个体之间肠道微生物组成存在显著差异。同时该研究还提出了一个全新的理念:宿主肠道微生物的组成和分布具备数量性状的特点,理应将其视为宿主的一个性状去看待和研究。
原文索引:[ZhaoL,etal.Quantitativegeneticbackgroundofthehostinfluencesgutmicrobiomesinchickens.Sci.Rep,2013,3:1163-1168.]
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文献和实验1、进入实验室工作衣、帽、鞋必须穿戴整齐。 2、在进行高压、干燥、消毒等工作时,工作人员不得擅自离开现场,认真观察温度、时间,蒸馏易挥发、易燃液体时,不准直接加热,应置水浴锅上进行。 3、严禁用口直接吸取药品和菌液,按无菌操作进行,如发生菌液、病原体溅出容器外时,应立即用有效消毒剂进行彻底消毒,安全处理后方能离开现场。 4、工作完毕,两手用清水肥皂洗净,必要时可用(杀菌剂)新洁尔灭、过氧乙酸液浸泡手,然后用水冲洗,工作服应经常清洗,保持整洁,必要时高压消毒。 5、实验完毕,及时清理现场
市面上销售的食品均需经过质检部门的微生物检测,以确保食用安全。固体或液体样品在微生物检测前要经过处理才能进行后续分析。据统计样品前处理所用的时间占到整个检测时间的60%以上,且检测条件的不合格常会造成,因此提高样品前处理的效率、控制检测过程中的交叉污染对于整个食品微生物检测对具有重要意义。 样品前处理的流程大概如下:固体或液体样品采样25g/mL后,经过1:10的稀释,再进行均质处理,取得适于接种的样品溶液,用于后续微生物培养分析。 由上表看出,重量稀释和拍打均质的方法进行样品
氏菌所致。未接受过治疗的病人致死率可超过10%,而对经过适当医疗的病人其致死率低于1%,幸存者可变成慢性无症状沙门氏菌携带者。这些无症状携带者不显示发病症状仍能将微生物传染给其他人(传统的例子就是玛丽伤寒)。 沙门氏菌胃肠炎,潜伏期一般6-72小时,主要症状为恶心、呕吐、腹绞痛、腹泻、发热寒颤头痛。病程一般1-2天或更长。感染剂量为15-20个菌,死亡率达1-4%。最易感群体是年幼儿童、虚弱者、年长老人、免疫缺陷者等。污染源主要是人和家畜的粪便,沙门氏菌常存在于动物中,特别是禽类和猪









