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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃保存
- 保质期:
有效期1年
- 英文名:
Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) (1U/μl)
- 库存:
大量
- 供应商:
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 规格:
250U(10322ES72)
产品信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格(元) |
| Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) (1 U/μl) 虾碱性磷酸酶 | 20429ES72 | 250U | -20℃ | 656.00 |
产品描述
Alkaline Phosphatase,中文名碱性磷酸酶,可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除,常用于阻止载体的自连作用:在分子克隆实验中,DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在,载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’ 端无磷酸基团,因而不可以和自身3’ 端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止,提高了目的片段插入率。另外,碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板,以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。
产品组分
| 组分编号 | 组分名称 | 规格 |
| 20429-A | Shrimp Alkaline Phosphatase (rSAP) (1U/μl) | 250U |
| 20429-B | 10×rSAP buffer | 1.25ml |
产品性质
| 来源(Source) | 携带北极虾(Pandalus borealis)碱性磷酸酶基因表达质粒的毕赤酵母 |
| 分子量(Molecular Weight) | 单体分子量54 kDa;rSAP为同源二聚体。 |
| 质量控制(Quality Control) | 无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染 |
| 比活(Specific Activity) | ~3000U/mg |
| 纯度(Purity)SDS-PAGE | >95% |
| 热灭活(Thermal Inactivation) | 65℃温浴5 min,活性完全不可逆丧失 |
| 储存液条件(Storage conditions) | 25mM Tris-HCl (pH7.5), 1 mM MgCl2,50% Glycerol |
| 活性定义(Unit definition) | 37℃条件下,1ml反应体系中1min内能水解(p-nitrophenylphosph- ate)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。 |
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存。
注意事项
1)本品同其他碱性磷酸酶类似,具有Zn2+和Mg2+依赖性,本品配方中酶活性中心有紧密结合的锌原子,反应中无需再次补充。
2)金属离子螯合剂(如EDTA)、无机磷酸盐等会抑制该酶活性。单价盐离子会使活性增强。
3)DTT、β-ME等还原剂存在时,该酶活性会降低。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
DNA去磷酸化
① 在EP管中加入下列试剂*:
| DNA 片段** | 1pmol |
| 10×rSAP buffer | 2µl |
| Shrimp Alkaline Phosphatase (1U/μl) | 1µl |
| 无菌ddH2O | Up to 20µl |
【**】:1 pmol DNA片段量约相当于1ug 3kb大小的质粒。
② 混匀上述试剂,于37℃孵育30min。
③ 将EP管65℃,5min温浴,终止反应。
【注】:也可直接向酶切体系中加入rSAP酶进行去磷酸化(按每1pmol DNA末端加入1U的rSAP),37℃温浴30-60min,并热失活rSAP和限制性内切酶。如果内切酶不能被活化,建议将DNA进行纯化。
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文献和实验Phosphatasing with Shrimp Alkaline Phosphatase (S.A.P.)
Phosphatasing with Shrimp Alkaline Phosphatase (S.A.P.) Use to prevent linearized vector plasmid from recircularizing. The phosphatase from shrimp is easier to get rid of than is CIP, because SAP is heat labile.
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