虾碱性磷酸酶(SAP)

特别提示：包括虾碱性磷酸酶(SAP)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：虾碱性磷酸酶(SAP)
英文名称：Shrimp Alkaline Phosphatase
产品货号：MT0093
产品规格：500U|5000U

虾碱性磷酸酶催化DNA和RNA的5"和3"磷酸单脂的去磷酸化反应，也可水解核糖和脱氧核糖核苷三磷酸（NTP和dNTP）。该酶在分子生物学研究中应用广泛，如去除DNA和RNA 末端的磷酸基团，用于后续的克隆和探针末端标记。在克隆中，载体经虾碱性磷酸酶去磷酸化后因5"端无磷酸基团，因而不可以和自身3"端连接。虾碱性磷酸酶可作用于5’突出端、凹陷端和平末端，也可用来降解PCR反应中的游离dNTP，用于制备测序模板和SNP分析。该虾碱性磷酸酶在65℃温育5分钟即可完全的、不可逆的失活，因此，在连接或末端标记之后，可以不用去除。基于以上特性，该酶是传统去磷酸化酶--小牛肠碱性磷酸酶的绝佳替代物。

产品应用：
·DNA和RNA的去磷酸化；
·防止克隆载体的自连；
·制备5′末端标记模板；
·去除PCR产物中的dNTP和焦磷酸盐。

产品组成：

组分	500U	5000U
Shrimp Alkaline Phosphatase(5U/μl)	100μl	1ml
10×SAP Buffer	1ml	10ml

保存条件：-20℃可保存3年。

单位定义：1单位指在25℃条件下，30分钟能使1μg经HindIII（产生5"突出末端）消化的pUC19 DNA 去磷酸化所需的酶量。去磷酸化标准是指在自连接反应中能抑制＞95%的DNA再连接。

使用注意事项：
1．1×SAP Buffer：50mM Bis-Tris HCl pH6.0，1mM MgCl₂，0.1mM ZnCl₂，25℃温育。
2．热失活：65℃ 加热 5 分钟，不可逆失活。该酶通常用于酶切载体的去磷酸化，因其不可逆热失活特性。当完成去磷酸化反应后，无需再纯化产物，可以直接用于后续连接反应。
3．虾碱性磷酸酶也可以用来降解PCR反应中的游离dNTP，用于制备测序模板和 SNP 分析。同样无需纯化，可直接用于下游实验。

除了虾碱性磷酸酶(SAP),，我公司还供应以下相关产品：



名称：Klenow片段(3′→5′exo-)
货号：BTN131235
规格：200U
Klenow片段是大肠杆菌DNA聚合酶I的蛋白水解产物。它保留了DNA聚合酶活性，具有3′→5′外切酶活性，但不具有5′→3′外切核酸酶活性。可以在DNA模板和引物存在的条件下，选择性地催化底物dNTP沿5′→3′方向合成与模板互补的DNA。本产品是重组表达得到。

产品用途：
1．双链DNA 5′突出末端的平滑化。
2．用随机引物制备探针。
3．随机引物标记法。
4．寡核苷酸定向诱变中双链DNA的合成。
5．双脱氧法DNA序列测定(Sanger法)。

产品组成：

成分	规格
Klenow片段(5U/μL)	20μl
10×Klenow Fragment Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：以合成的Poly d(A-T)DNA为模板/引物，在37℃、pH7.4的条件下，30分钟内使10nmol的全核苷酸掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。

使用举例：(随机引物的同位素标记反应)
1．在微量离心管中配制下列反应液

成份	用量
模板DNA	25ng
随机引物(6-9mer)(1nmol/μl)	2μL
补超纯水到	14μL

2．95℃保温3分钟。然后冰中急冷5分钟。
3．加入2.5μl 10×Klenow Fragment Buffer。
4．加入2.5μl dNTP(0.2mM dATP,dGTP,dTTP)。
5．加入5μl 111TBq/mmol[α-32P].dCTP(3000 Ci/mmol)(1.85 MBq，50μCi)
6．加入1μl本产品，反应液共25μl。
7．37℃反应3小时。
8．65℃加热5分钟。
 反应液可直接作为探针使用。如有必要，可以通过用我司柱式探针纯化试剂盒除去未反应的标记的dCTP。

注意事项：
1．本酶有高度稳定性，稀释时不失活，但剧烈搅拌会失活。
2．由于不含有 5′→3′的外切核酸酶活性，因此没有切口平移活性。
3．可用于双链DNA末端以及缺口的修复。
4．与T4 DNA Polymerase相比，对模板高级结构的抵抗性能较好。
5．由于对DNA的亲和性较强，过量使用易发生凝集作用从而抑制反应进行。
6．若用于5′突出末端的修饰时，补平后有时会多加一个碱基。
7．与DNA Polymerase I相同，ddNTPs的掺入不受底物抑制。