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Thermo Scientific FastDigest®

HincII 快速酶切 37°C孵育
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  • Thermo scientific -fermentas
  • FD0494
  • 2025年09月27日
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    • - 推荐的缓冲液 : FastDigest®缓冲液
    • - 孵育温度37°C
    • - 连接效率95%
    • - CpG甲基化重叠可能影响DNA切割
    • - 热失活65°C, 5 min
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X FastDigest® Buffer 10X FastDigest® Green Buffer
    FD0494 100 µl (100 react.) 1.00 ml 1.00 ml FD0494
    Reaction conditions
    Reaction temperature Digestion time with 1µl of FastDigest® enzyme, min bp from end of DNA required for complete digestion Thermal inactivation Incubation time without star activity, hours
    Lambda, 1µg/20µl Plasmid DNA, 1µg/20µl PCR product, ~0.2µg/30µl Genomic DNA, 1µg/10µl
    37°C 5 5 5 10 1 65°C, 5 min 16

    Lambda DNA
    1.0%琼脂糖
    35 切割位点

    配方
    1 µl (1 FDU)是指在37°C,1X FastDigest® 缓冲液中5分钟内酶切1 µg lambda DNA所需的酶量。

    推荐反应条件
    1X FastDigest®缓冲液或 1X FastDigest® Green 缓冲液,37°C。
    1 µl FastDigest® HincII可在
    – 5分钟内酶切1 µg lambda DNA;
    – 5分钟内酶切1 µg质粒DNA;
    – 5分钟内酶切0.2 µg PCR扩增产物;
    – 10分钟内酶切1 µg基因组DNA或60分钟内酶切5 µg基因组DNA。

    商业化同裂酶
    采用REsearch™软件寻找同功酶。

    甲基化影响
    Dam: 无重叠 – 不影响。
    Dcm: 无重叠 – 不影响。
    CpG: 可能重叠 – 部分影响。
    EcoKI: 可能重叠 – 阻止酶切。
    EcoBI: 可能重叠 – 阻止酶切。

    Methylation type Sequence Cleavage effect
    CpG

    5'...GTYRAm5C G ...3'
    3'...CARYT Gm5C ...5'

    部分影响
    CpG

    5'...m5C G TYRAm5C G ...3'
    3'... Gm5C ARYT Gm5C ...5'

    阻止酶切
    CpG

    5'...GTm5C G AC...3'
    3'...CA Gm5C TG...5'

    部分影响
    EcoBI (TGA(N)8 TGCT)

    5'...GTTGm6AC(N)7 TGCT...3'
    3'...CAAC TG(N)7 m6ACGA...5'

    阻止酶切
    EcoKI (AAC(N)6 GTGC)

    5'...GTYAm6AC(N)6 G TGC...3'
    3'...CART TG(N)6 Cm6ACG...5'

    阻止酶切
    Number of recognition sites in DNA molecules
    Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
    35 13 1 2 1 1
    pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
    1 1 1 1 1 2

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