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- FD1703
- 2025年09月25日
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|
| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X FastDigest® Buffer | 10X FastDigest® Green Buffer | ||||
| FD1703 | 50 µl (50 react.) | 1.00 ml | 1.00 ml | FD1703 | |
| FD1704 | 100 µl (100 react.) | 1.00 ml | 1.00 ml | FD1704 | |
| Reaction temperature | Digestion time with 1µl of FastDigest® enzyme, min | bp from end of DNA required for complete digestion | Thermal inactivation | Incubation time without star activity, hours | |||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Lambda, 1µg/20µl | Plasmid DNA, 1µg/20µl | PCR product, ~0.2µg/30µl | Genomic DNA, 1µg/10µl | ||||
| 37°C | 5 (pBR322 DNA) |
5 | not applicable | 10 | 1 | 80°C, 5 min | 16 |
pBR322 DNA
1.4%琼脂糖
22 切割位点
1 µl FastDigest® DpnI可在
– 5分钟内酶切1 µg pBR322 DNA(dam 甲基化);
– 5分钟内酶切1 µg质粒DNA;
– 不适合PCR扩增产物
– 10分钟内酶切1 µg基因组DNA或60分钟内酶切5 µg基因组DNA。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| CpG | 5'...Gm6A Tm5C G ...3' |
|
| Dam (GATC) | Gm6ATC |
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 116 | 0 | 7 | 22 | 15 | 15 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 15 | 15 | 15 | 15 | 22 | 15 |
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DpnI mediated site-directed Mutagenesis
, 68°C 2 minutes/kb of plasmid length 3. Degradation of methylated (parental) DNA with DpnI Cool down PCR reaction. Add 1µl Dpn I (10 unit) to PCR reaction 37°C and incubate for 1 hr. 4. Transformation into E. coli
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