说明
Endonuclease V,
T.maritima (Endo V)是一种参与DNA修复的3’-内切核酸酶,从损伤的DNA中除去脱氨基碱基,包括尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤,见图1。
Endonuclease V对含有脱碱基位点、尿素位点、碱基对错配、分叉和类似Y型结构、小型插入/缺失的DNA分子有活性,切割损伤位点3’端第二个磷酸二酯键。酶过量时,该酶在原有缺口产物的互补链上产生新切口,从而使双链断裂。低浓度时,Endonuclease V优先切割靠近DNA链5’-端的损伤位置。单链DNA的切割效率很低。Mg2+或Mn2+离子对该酶活性至关重要(1, 2, 3)。
来源
大肠杆菌,含有海栖热孢菌(Thermotoga maritima)来源的克隆基因nfi。
分子量
25 kDa,单体。
活性单位定义
1个活性单位是指在65°C、30分钟内改变1 μμg脱嘌呤的超螺旋质粒DNA拓扑结构状态所需的酶量。
酶活性分析混合物:25 mM HEPES-NaOH (pH 7.4), 5 mM MgCl2, 5 mM DTT, 2% (v/v)甘油, 2 µg部分脱嘌呤的pUC19 DNA。
保存缓冲液
保存缓冲液组分:
20 mM HEPES-NaOH (pH 7.4), 5 mM DTT, 50 mM NaCl, 0.1% (v/v) Triton X-100和50% (v/v)甘油。
10X 反应缓冲液
500 mM Tris-acetate (pH 7.5), 500 mM KCl, 10 mM EDTA, 0.5% (v/v) Triton X-100。
质量控制
相关测试表明无内切或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染。
抑制与失活
- 抑制剂:无特异性抑制剂。
- 失活:加入EDTA,沸水浴10分钟。
Notice
Use of this enzyme in certain applications may be covered by patents and may require a license.