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Endonuclease IV, (Endo IV)

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  • 2025年11月04日
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    • - 热失活80°C, 15 min
    • - 重组酶
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Reaction Buffer
    EN0591 100 u (2 u/µl) 1.00 ml EN0591
    Applications

    • DNA损伤和修复研究(3, 4, 5)。
    • 单细胞电泳(Comet分析) (6)。
    • 抗肿瘤药物研究(4)。
    • DNA结构研究(5, 7)。
    • SNP分析(8)。
    说明
    Endonuclease IV (Endo IV)识别dsDNA中的脱嘌呤/嘧啶(AP)位点,切割损伤位点5’端的磷酸二酯键,产生具有羟基基团的3’-末端,见图1。该酶也可作为3’-二酯酶,从dsDNA的损伤末端释放3’-磷酸乙醇酸或3’-磷酸盐(1)。Endo IV还具有3’-5’ 外切酶活性。该酶在底物上的合成对离子强度、金属离子、EDTA和还原条件非常敏感。3’-5’外切酶活性优先作用具有3’缩进末端的底物(2)。

    酶切活性无需Mg2+离子,中等浓度EDTA不影响酶活性。


    来源
    含有nfo 克隆基因的大肠杆菌。

    分子量
    31.6 kDa,单体。

    活性单位定义
    1个活性单位是指在37°C、30分钟内使 1 μg部分脱嘌呤的共价环化的超螺旋质粒DNA松弛所需要的酶量。

    酶活性分析混合物:50 mM Tris-acetate (pH 7.5), 50 mM KCl, 1 mM EDTA, 0.05% (v/v) Triton X-100, 2 µg部分脱嘌呤的pUC19 DNA。


    保存缓冲液
    保存缓冲液组分:
    50 mM Tris-acetate (pH 7.7), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.05% (v/v) Triton X-100和50% (v/v)甘油。

    10X 反应缓冲液
    500 mM Tris-acetate (pH 7.5), 500 mM KCl, 10 mM EDTA, 0.5% (v/v) Triton X-100。

    质量控制
    相关测试表明无其它内切或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染。

    抑制与失活
    • 抑制剂:尽管该酶反应时对EDTA不敏感。反应体系中无DNA底物时,即使亚毫摩尔螯合剂也会影响酶活性。
    • 失活:80°C加热15分钟。


    图1。Endonuclease IV, E.coli 活性。

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