BrdU标记法组织石蜡切片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒

BrdU标记法组织石蜡切片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

BrdU标记法组织石蜡切片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂是一种旨在使用标准化的化学分离石蜡方法和免疫荧光染色技术，分析经过BrdU标记预处理（即使用溴脱氧尿嘧啶核苷替代脱氧胸腺嘧啶核苷整合到组织中合成的DNA链）的存档中的石蜡包埋组织切片，其DNA合成水平的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种BrdU标记预处理的动物组织（动物、人体、植物等）的DNA合成分析。广泛用于细胞衰老、细胞凋亡的研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定，荧光清晰。

技术背景

溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxyuridine；BrdU）是DNA前体胸腺嘧啶核苷类似物，通过竞争掺入DNA合成期（S期）细胞单链DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶。由于组织细胞内无内源性BrdU存在，应用BrdU与胸腺嘧啶竞争掺入的强度，来分析细胞增殖状况，包括增殖细胞的种类，增殖速度等细胞动力学问题。自82年Gratzer制备出抗BrdU单抗及标记检测技术后，应用BrdU标记的敏感性已与氘胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）相似，而成为取代同位素的非放射性标记物之一。通常使用免疫组化方法定量或定性检测其标记，反映细胞繁殖、细胞周期和DNA合成以及含量等。

产品内容

去石蜡液（Reagent A） 毫升
补水液A（Reagent B） 毫升
补水液B（Reagent C） 毫升
补水液C（Reagent D） 毫升
补水液D（Reagent E） 毫升
清理液（Reagent F） 毫升
固着液（Reagent G） 毫升
修复液（Reagent H） 毫升
变性液（Reagent I） 毫升
中和液（Reagent J） 毫升
封阻液（Reagent K） 毫升
抗体液（Reagent L） 毫升
染色液（Reagent M） 毫升
复染液（Reagent N） 毫升
抗淬灭液（Reagent O） 微升
产品说明书 1份

保存方式

保存固着液（Reagent G）、修复液（Reagent H）、封阻液（Reagent K）、抗体液（Reagent L）、染色液（Reagent M）、复染液（Reagent N）和抗淬灭液（Reagent O）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；抗体液（Reagent L）和染色液（Reagent M）严禁反复冻融； 染色液（Reagent M）、复染液（Reagent N）和抗淬灭液（Reagent O）避免光照；有效保证6月

用户自备

盖玻片：用于封片孵育
小型染色缸：用于去石蜡处理
培养箱：用于组织细胞染色孵育
荧光显微镜：用于组织细胞荧光观察

实验步骤

• 去石蜡处理

1. 取出10片待测的3至5微米厚的石蜡包埋的组织切片（注意：石蜡包埋前，组织切片须用10％甲醛4℃条件下，固定16小时，此步很重要）
2. 放进80℃烘箱，孵育30分钟
3. 室温下静置15分钟
4. 按下表依次放进小染色缸里孵育

染色缸	孵育时间
xx毫升去石蜡液（Reagent A）	15分钟
xx毫升去石蜡液（Reagent A）	15分钟
xx毫升去石蜡液（Reagent A）	15分钟
xx毫升补水液A（Reagent B）	3分钟
xx毫升补水液B（Reagent C）	3分钟
xx毫升补水液C（Reagent D）	3分钟
xx毫升补水液D（Reagent E）	3分钟

5. 小心移去切片上的补水液D（Reagent E）
6. 小心加上xx微升清理液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面
7. 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

• 免疫染色处理

实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：

1. 加上xx微升－20℃预冷的固着液（Reagent G），铺满切片表面
2. 置于冰槽里孵育15分钟
3. 小心抽去固着液
4. 加上xx微升修复液（Reagent H），铺满切片表面
5. 室温下孵育30分钟
6. 小心抽去修复液
7. 加上xx微升变性液（Reagent I），铺满切片表面
8. 室温下孵育30分钟
9. 小心抽去变性液
10. 加入xx微升中和液（Reagent J），铺满切片表面
11. 小心抽去中和液
12. 加上xx微升封阻液（Reagent K），铺满切片表面
13. 置于37℃培养箱里孵育30分钟，保持湿润
14. 小心抽去封阻液
15. 加上xx微升抗体液（Reagent L），铺满切片表面
16. 盖上盖玻片，置于37℃培养箱里孵育30分钟（注意：避免气泡）
17. 小心移去盖玻片，抽去抗体液（Reagent L）
18. 加上xx微升清理液（Reagent F），铺满切片表面
19. 置于45℃培养箱里孵育5分钟，保持湿润
20. 小心抽去清理液
21. 重复实验步18至20二次
22. 加上xx微升染色液（Reagent M），铺满切片表面
23. 盖上新的盖玻片，置于37℃培养箱里孵育30分钟，避免光照（注意：避免气泡）
24. 小心移去盖玻片，抽去染色液（Reagent M）
25. 加上xx微升清理液（Reagent F），铺满切片表面
26. 置于45℃培养箱里孵育5分钟，保持湿润
27. 小心抽去清理液
28. 重复实验步25至27二次
29. 加上xx微升复染液（Reagent N），铺满切片表面
30. 室温下孵育3分钟，避免光照
31. 小心抽去复染液
32. 加入xx微升抗淬灭液（Reagent O）
33. 盖上盖玻片或封片
34. 即刻在荧光显微镜下观察

注意事项

1. 本产品为10次操作量
2. 在整个操作过程中须戴手套，以防污染
3. 动物BrdU标记预处理――方法一：30微克BrdU/克动物体重，静脉注射，1小时后，手术取出组织或方法二：先手术取出组织，浸泡在BrdU液体里，37℃孵育60分钟，清洗数次；然后进行切片处理（建议使用溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）溶液－GMS12194
4. 石蜡包埋前，组织切片须用10％甲醛4℃条件下，固定16小时，否则造成样品支离破碎
5. 每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干。空气中晾干状态为没有水滴，呈湿润状态，可见反光
6. 试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
7. 孵育时，须避免光照
8. 建议组织细胞染色完成后，即刻进行荧光显微镜观察。如果放进4℃冰箱里待测，不要超过3天
9. 本公司提供系列细胞凋亡和衰老检测试剂产品

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺

上海羽哚生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。