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BrdU标记法细胞繁殖流式细胞仪检测试剂盒

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  • 2025年07月14日
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      上海羽哚

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      10次


    BrdU标记法细胞繁殖流式细胞仪检测试剂盒产品说明书（中文版）

    主要用途

    BrdU标记法细胞繁殖流式细胞仪检测试剂是一种旨在使用溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）替代脱氧胸腺嘧啶核苷（Thymidine）整合到合成的DNA链中，再运用抗BrdU单克隆抗体以及荧光染料缀合物二抗，通过双重参数细胞流式仪定量检测DNA含量、分析细胞周期和细胞繁殖水平的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种活体细胞（动物、人体、植物等）的DNA含量测定。广泛用于细胞繁殖，包括细胞衰老、细胞凋亡的研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定。

    技术背景

    溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxyuridine；BrdU）是DNA前体胸腺嘧啶核苷类似物，通过竞争掺入DNA合成期（S期）细胞单链DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶。由于组织细胞内无内源性BrdU存在，应用BrdU与胸腺嘧啶竞争掺入的强度，来分析细胞增殖状况，包括增殖细胞的种类，增殖速度等细胞动力学问题。自82年Gratzer制备出抗BrdU单抗及标记检测技术后，应用BrdU标记的敏感性已与氘胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）相似，而成为取代同位素的非放射性标记物之一。通常使用免疫组化方法定量或定性检测其标记。反映细胞繁殖、细胞周期和DNA合成以及含量等。流式细胞术（FLOW CYTOMETRY）是七十年代发展起来的集计算机、激光、流体力学、细胞化学、细胞免疫学为一体的高科学技术。

    产品内容

    标记液（Reagent A） 微升
    清理液（Reagent B） 毫升
    固着液（Reagent C） 毫升
    修复液（Reagent D） 毫升
    变性液（Reagent E） 毫升
    中和液（Reagent F） 毫升
    抗体液（Reagent G） 微升
    封阻液（Reagent H） 毫升
    染色液（Reagent I） 微升
    复染液（Reagent J） 毫升
    产品说明书 1份

    保存方式

    保存 标记液（Reagent A）、 固着液（Reagent C）、 修复液（Reagent D）、 抗体液（Reagent G）、 封阻液（Reagent H）、 染色液（Reagent I）和 复染液（Reagent J）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里； 抗体液（Reagent G）和 染色液（Reagent I）严禁反复冻融； 标记液（Reagent A）、 染色液（Reagent I）和 复染液（Reagent J），避免光照；有效保证6月
    用户自备

    胰蛋白酶乙二AN四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离
    完全细胞培养液（GMS12052）：用于中和胰蛋白酶的处理
    15毫升锥形离心管：用于细胞收集的操作
    1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器
    台式离心机：用于细胞收集的操作
    微型台式离心机：用于细胞收集的操作
    细胞流式仪：用于细胞荧光分析

    实验步骤

    实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：
    1. 准备1个6孔细胞培养板的细胞（1 X 106细胞/3毫升培养液/孔）
    2. 加入xx微升 标记液（Reagent A），避免光照
    3. 轻轻摇动培养板，混匀
    4. 放进37℃细胞培养箱孵育1小时，避免光照
    5. 小心抽去含有 标记液（Reagent A）细胞培养液
    6. 加入xx毫升 清理液（Reagent B），铺满培养孔表面
    7. 小心抽去 清理液（Reagent B）
    8. 重复实验步骤6至7一次
    9. 加入1毫升用户自备的胰蛋白酶乙二AN四乙酸混合液
    10. 放进37℃细胞培养箱孵育1分钟
    11. 加入3毫升用户自备的完全细胞培养液
    12. 移取细胞混匀液到15毫升锥形离心管
    13. 放进台式离心机离心10分钟，速度为400g（或1500rpm，例如EPPENDORF 5810R）
    14. 小心抽去上清液
    15. 加入xx毫升 清理液（Reagent B），混匀细胞颗粒群
    16. 放进台式离心机离心10分钟，速度为400g（或1500rpm，例如EPPENDORF 5810R）
    17. 小心抽去上清液
    18. 加入xx微升 清理液（Reagent B），混匀细胞颗粒群
    19. （选择步骤）细胞计数
    20. 同时准备1个－20℃预冷的新的15毫升锥形离心管
    21. 加入xx毫升－20℃预冷的 固着液（Reagent C）
    22. 用xx微升枪头一滴一滴加入细胞悬液到含有预冷的 固着液（Reagent C）里，保持轻度涡旋震荡
    23. 置于冰槽里孵育15分钟
    24. 放进台式离心机离心5分钟，速度为400g（或1500rpm，例如EPPENDORF 5810R）
    25. 小心抽去上清液
    26. 加入xx毫升 修复液（Reagent D），上下抽吸混匀
    27. 转移到1.5毫升离心管
    28. 室温下孵育30分钟
    29. 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
    30. 小心抽去上清液
    31. 用手指轻弹管底，使细胞颗粒松动
    32. 加入xx毫升 变性液（Reagent E）
    33. 涡旋震荡3秒
    34. 室温下孵育30分钟
    35. 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
    36. 小心抽去上清液
    37. 用手指轻弹管底，使细胞颗粒松动
    38. 加入xx毫升 中和液（Reagent F）
    39. 涡旋震荡3秒
    40. 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
    41. 小心抽去上清液
    42. 用手指轻弹管底，使细胞颗粒松动
    43. 加入xx微升 抗体液（Reagent G），充分混匀
    44. 室温下孵育45分钟
    45. 加入xx毫升 封阻液（Reagent H），混匀
    46. 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
    47. 小心抽去上清液
    48. 用手指轻弹管底，使细胞颗粒松动
    49. 加入xx微升 染色液（Reagent I），充分混匀
    50. 室温下孵育45分钟，避免光照
    51. 加入xx毫升 封阻液（Reagent H），混匀
    52. 涡旋震荡3秒
    53. 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
    54. 小心抽去上清液
    55. 重复实验步骤51至54二次
    56. 加入xx微升 复染液（Reagent J），用枪头充分混匀
    57. 移入到细胞流式仪专用测试管（可放进4℃冰箱里待测），避免光照
    58. 即刻进行细胞流式仪分析：波长488nm氩离子激光器，观察50000个细胞以上
    59. 建立地形图或散点图以及直方图分析


    注意事项
    1. 本产品为10次操作量
    2. 操作时，须戴手套，以防污染
    3. 孵育时，避免光照
    4. 建议细胞染色完成后，即刻进行细胞流式仪分析。如果放进4℃冰箱里待测，不要超过3天
    5. 细胞流式仪分析前，须混匀内容物
    6. 细胞检测量不得少于10000个
    7. 务必测试阳性或阴性对照组；阳性对照细胞建议使用U937、K562、MOLT4等
    8. 检测时，须弥补电子补偿，以去除双重参数的光谱重叠
    9. 告知流式仪技术员有关细胞类型
    10. 本公司提供细胞流式仪分析外包服务
    11. 本公司提供系列细胞凋亡和衰老检测试剂产品

    质量标准
    1. 本产品经鉴定性能稳定
    2. 本产品经鉴定标记清晰

    使用承诺

    上海羽哚生物因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

    友情提醒

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      一、原理细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞计数法等，这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。BrdU （5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料，经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占l/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染

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