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- 2025年07月15日
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参考说明书
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参考说明书
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大量
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上海羽朵
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20次
膜电位依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧初级荧光测定试剂盒产品说明书
（中文版）
主要用途
膜电位依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氯荧光乙酰乙酸盐，在线粒体氧化条件下，选择性阻止呼吸链通道，所产生的荧光，来定量检测线粒体内膜电位依赖性活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。可以被用于线粒体功能、氧化激发和抑制机理等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。
技术背景
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O -）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基
（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷 氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等 细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。2',7'-二氯荧光乙酰乙酸盐（2',7'-dichlorofluorescein diacetate，DCFH-DA）一种完全自由通过细胞膜的染色剂。一旦被过氧化氢、过氧化基、过氧亚硝基阴离子等氧化，便产生荧光。据此测定线粒体活性氧族的浓度。寡霉素
（oligomycin）完全抑制III态呼吸链。
产品内容
缓冲液（Reagent A） 毫升
选择液（Reagent B） 微升
补充液（Reagent C） 毫升
染色液（Reagent D） 微升
产品说明书 1 份
保存方式
保存在－20℃冰箱里， 染色液（Reagent D），严格避免光照； 有效保证 12 月
用户自备
培养箱：用于染色孵育
（共聚焦）荧光显微镜：用于观察荧光线粒体荧光酶标仪：用于测定线粒体荧光强度
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂放进冰槽里融化，避免光照；同时从－80℃冰箱里取出待测的线粒体， 放进冰槽里融化。然后进行下列操作。
- 准备 1 个 96 孔板，标记好背景对照孔和待测样品孔
- 分别加入 xx 微升 缓冲液（Reagent A）
- 分别加入 xx 微升 选择液（Reagent B）
- 移取 xx 微升线粒体悬液（总量为 50 微克线粒体蛋白）到 96 孔板的相应待测样品孔里
- 加入 xx 微升 补充液（Reagent C）到 96 孔板的相应背景对照孔里
- 分别加入 xx 微升 染色液（Reagent D）到上述孔里
- 放进 37℃恒温水槽孵育 15 分钟，避免光照
- 选择下列方式之一进行操作：
- 使用（共聚焦）荧光显微镜观察（定性检测）： 1）移取 10 微升上述悬液到载波片上，盖上盖玻片2）激发波长 490nm，散发波长 530nm――
-
- 或使用荧光分光光度酶标仪检测（定量检测）：
样品RFU－对照RFU＝实际线粒体RFU：增高，表明活性氧族（ROS）含量高
注意事项
- 本产品为 20 次操作
- 操作时，须戴手套
- 孵育时，须避免光照
- 建议染色完成后，即刻进行荧光分析
- 本公司提供呼吸链依赖性活性氧检测试剂产品
- 本公司提供系列活性氧检测试剂产品
质量标准
- 本产品经鉴定性能稳定
- 本产品经鉴定荧光清晰
使用承诺
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文献和实验有一种胖，反而有利于心血管健康！「肥胖悖论」新证据，源于脂肪
Extracellular vesicle-based interorgan transport of mitochondria from energetically stressed adipocytes 的研究性论文。研究揭示脂肪细胞通过快速释放小细胞外囊泡（Small extracellular vesicles, sEV） 来响应线粒体应激，这些 sEVs 中含有呼吸能力但氧化受损的线粒体颗粒，这些颗粒进入循环并被心肌细胞吸收，触发心肌产生 ROS，以保护心肌细胞免受急性氧化应激。这项研究有助于解释「肥胖悖论
Ca²⁺：看钙稳态是否失衡 线粒体参与细胞内Ca²⁺缓冲调控，而线粒体对Ca²⁺的摄取过程又会直接影响细胞代谢、线粒体膜电位，进而调控细胞死亡。 Rhod‑2 AM 是活细胞线粒体钙离子检测常用探针，探针与 Ca²⁺结合后荧光信号会显著增强，可借助荧光显微镜或流式细胞仪，检测不同实验组的线粒体 Ca²⁺水平差异。 注意要点：如果研究药物刺激、缺氧、ER应激或细胞死亡，线粒体Ca²⁺建议和膜电位、ROS一起检测。 六、呼吸链复合体活性：进一步定位是哪一环出了问题 线粒体氧
分离鉴定出NPZC，其特征为C-3位正丙酰基修饰，在天然倍半萜内酯类衍生物中罕见。细胞实验表明，NPZC兼具抗炎与抗氧化双重药效。在LPS诱导的巨噬细胞和H₂O₂诱导的肝细胞中，在无毒浓度下，NPZC能显著抑制炎症介质TNF-α、IL-6、NO、COX-2释放，有效清除HepG2细胞中的ROS，恢复抗氧化酶SOD、CAT、GSH活性，降低脂质过氧化产物MDA，并逆转线粒体膜电位下降； 斑马鱼实验：利用斑马鱼模型，验证了NPZC能打断“氧化-炎症”的恶性循环。在AAPH诱导的斑马鱼氧化应激模型中，NPZC能有效
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