酸性磷酸酶（AP）活力法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒

酸性磷酸酶活力法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途
酸性磷酸酶活力法细胞繁殖与毒性定量检测试剂是一种旨在通过细胞膜相关性酸性磷酸酶切离其底物对xiao基苯磷酸，生成黄色可溶性产物对xiao基酚， 作为检测信号来比色定量测定活体细胞繁殖和毒性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适用于各种生长中的真核生物细胞。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，操作简捷，着色清晰，重复可靠。

技术背景

作为细胞染色剂之一的对xiao基苯磷酸（p－Nitrophenyl phosphate；PNPP），是酸性磷酸酶的一种可溶性无色底物，其代谢产物对xiao基酚呈现黄色。细胞繁殖快，其代谢旺盛，细胞膜上的酸性磷酸酶的活性增强，从而切离对xiao基苯磷酸，而产生颜色深浅，在 405nm 波长下产生吸收峰：吸光值与细胞量成线性正相关，反映细胞活力。

产品内容

缓冲液（Reagent A） 毫升
染色液（Reagent B） 毫升
产品说明书 1 份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，避免光照，有效保证 6 月

用户自备

酶标仪：用于定量检测染色细胞 移液排枪：用于同步加入染色试剂

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒放在室温下融化，置于暗室里。然后进行下列操作。一、 直接检测

1. 从细胞培养箱里取出待测的 96 孔细胞培养板
2. 确保 96 孔板中每一个孔含有 200 微升细胞培养液（注意：建议使用无酚红培养液）
3. 小心加入xx 微升 染色液（Reagent B）到 96 孔板中每一个孔里
4. 轻轻摇动 96 孔板，使其混匀
5. 放进 37℃培养箱里，孵育 2 小时（可见溶液呈现黄色）

6. 即刻放进酶标仪测读：染料波长 405nm；参考波长 690nm
7. 实际读数：OD405－OD690
8. 绘制细胞生长曲线：纵座标（Y 轴）为吸光值（OD）；横坐标（X 轴）为细胞数二、 间接检测

1. 准备 1 个 50 毫升锥形离心管
2. 加入xx 毫升 缓冲液（Reagent A）
3. 加入xx 毫升 染色液（Reagent B），混匀
4. 放在暗室里备用，避光，标记为 染色工作液
5. 从细胞培养箱里取出待测的 96 孔细胞培养板
6. 小心抽去细胞培养液
7. （选择步骤）加入 xx 微升 缓冲液（Reagent A）到 96 孔板中每一个孔里
8. （选择步骤）小心抽去缓冲液
9. 加入xx 微升上述配制的 染色工作液到 96 孔板中每一个孔里10．放进 37℃培养箱里，孵育 2 小时（可见溶液呈现黄色） 11．即刻放进酶标仪测读：染料波长 405nm；参考波长 690nm 12．实际读数：OD405－OD690

13．绘制细胞生长曲线：纵座标（Y 轴）为吸光值（OD）；横坐标（X 轴）为细胞数

注意事项

1. 本产品为 100 次（1 个 96 孔细胞培养板）操作
2. 操作时须戴手套
3. 整个操作须无菌操作，细菌感染会造成检测异常
4. 建议 96 孔板里的细胞量在 1000 至 100000 范围为理想状态
5. 孵育时，须避光
6. 建议使用无细胞空对照作为背景读数
7. 悬浮细胞（例如血白细胞等）建议使用直接检测法
8. 如果细胞密度过低，可以延长孵育时间至 4 小时
9. 含有酚红的培养液容易增加背景读数，而造成敏感性降低10．直接检测法要求每个孔的培养液容量等同，避免误差 11．本公司提供系列细胞繁殖和毒性检测试剂产品

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定着色清晰

使用承诺

上海羽哚生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后， 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）