中性红细胞繁殖比色法定量检测试剂盒

中性红细胞繁殖比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途
中性红细胞繁殖比色法定量检测试剂是一种旨在通过活体细胞吸入中性红染料，并与活细胞溶酶体基质结合而聚集和滞留在细胞内作为检测信号来比色定量测定活体细胞存活与繁殖能力的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适用于各种贴壁生长中的真核生物细胞。运用于药物学、环境化学、营养学等细胞学研究。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，着色清晰，检测敏感。

技术背景

作为细胞染色剂之一的中性红，又称二苯乙烯红（Basic Red 5；Toluylene Red；Neutral Red）。其化学名为： 2-甲基-3-氨基-6-二甲氨基二氮杂蒽盐酸盐（3-Amino-6-dimethylamino-2-methyl-Phenazine hydrochloride）。 中性红是一种弱阳离子染料，它的分子式为C15H17ClN4，分子量是288.78。中性红可以自由地进入活细胞中
（主动运输），通过与溶酶体基质上阴离子部位结合并整合，使之在pH水平低于胞浆环境的溶酶体内大量聚集和滞留。细胞表面和溶酶体膜的改变，将导致细胞吸收和溶酶体结合降低，以此区别活体细胞、损伤细胞和死亡细胞，同时可以测定化学药物的IC50（50％抑制浓度）。中性红结晶产物留存在细胞内，使用特定有机化物质溶解结晶颗粒而呈现出颜色深浅，在540nm波长下产生吸收峰：吸光值与细胞量成线性正相关， 反映细胞活力。

产品内容
染色液（Reagent A） 清理液（Reagent B） 溶解液（Reagent C）		毫升毫升毫升
产品说明书		1 份
保存方式
保存在 4℃冰箱里，避免光照，有效保证 6 月
用户自备
酶标仪：用于定量检测染色细胞
移液排枪：用于同步加入染色试剂
实验步骤
从细胞培养箱里取出待测的 96 孔细胞培养板 小心抽去每孔细胞培养液 小心加入 微升 染色液（Reagent A）到	孔板中每一个孔里

4. 放进 ℃培养箱里，孵育 分钟
5. 小心抽去每孔中的 染色液（Reagent A）（注意：确保培养孔中无任何液体残留）
6. 小心加入 微升 清理液（Reagent B）到 孔板中每一个孔里
7. 小心抽去每孔中的 清理液（Reagent B）（注意：确保培养孔中无任何液体残留）
8. 重复实验步骤 和 一次
9. 小心加入 微升 溶解液（Reagent C）到 孔板中每一个孔里
10. 室温下，孵育 分钟，避免光照
11. 轻轻摇动 孔板，使其混匀
12. 即刻放进酶标仪测读：波长 nm
13. 绘制细胞生长曲线：纵座标（Y 轴）为吸光值（OD）；横坐标（X 轴）为细胞数

注意事项

1. 本产品为 500 次（5 个 96 孔细胞培养板）操作
2. 操作时须戴手套
3. 整个操作须无菌操作
4. 建议 96 孔板里的细胞量在 1000 至 100000 范围为理想状态
5. 本产品适宜于贴壁细胞
6. 孵育时，须避光
7. 建议使用无细胞空对照作为背景读数
8. 可以使用 550nm 波长的滤波器替代
9. 可以使用其它培养板检测，相应调整试剂用量
10. 本公司提供系列细胞繁殖和毒性检测试剂盒

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定着色清晰

使用承诺

上海羽哚生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定， 保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。