XTT比色法细胞繁殖测定试剂盒

XTT 比色法细胞繁殖测定试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

XTT比色法细胞繁殖测定试剂是一种旨在通过可溶性四氮唑XTT和电子偶联化合物在代谢旺盛细胞中的脱氢酶的作用下，产生水溶性桔红色甲簪产物，作为检测信号来比色定量测定活体细胞繁殖状况的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。替代传统的操作繁琐和有害物质同位素[³H]-thymidine或[⁵¹Cr]释放检测。适用于各种生长中的动物、人体、酵母、细菌等细胞以及细胞毒力检测。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，着色清晰，具有高通量功能。

技术背景

在细胞生物学中，细胞繁殖检测常常用于研究生长因子、细胞因子、营养因子、化学物、以及淋巴细胞的激活和毒力作用。作为细胞染色剂之一的黄色四氮唑（tetrazolium），XTT（sodium 3-[1-(phenylaminocarbonyl)- 3, 4-[tetrazolium]-bis (4- methoxy-6-nitro) benzene sulfonic acid hydrate]）和电子偶联化合物染料可以自由地进入活细胞中。细胞繁殖快，其代谢旺盛，线粒体内脱氢酶的活性增强，从而还原细胞浆中的染料为无毒性、水溶性、桔红色产物而留存在细胞内，在 450nm 波长下产生吸收峰：吸收峰值值与细胞量成线性正相关。这是继不溶性MTT 染料检测后的更新换代的产品。

产品内容

染色液（Reagent A） 毫升
结合液（Reagent B） 微升
产品说明书 1 份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，避免光照和反复冻融；有效保证 6 月

用户自备

1.5 毫升离心管：用于直接法染色工作液配制的容器培养箱：用于反应孵育
酶标仪：用于定量检测染色后的细胞

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent A）和结合液（Reagent B） 在室温下融化。然后移出 毫升染色液（Reagent A）和 微升结合液（Reagent B） 到新的1.5毫升离心管，混匀后，在室温下静置，并标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。

1. 从细胞培养箱里取出待测的 96 孔细胞培养板
2. 确保 96 孔板中每一个孔含有 100 微升细胞培养液
3. 小心加入 微升 染色工作液到 96 孔板中每一个孔里
4. 放进 37℃培养箱里，孵育 4 小时，或直至呈现桔红色（注意：对于不敏感细胞或生长缓慢细胞，可以延长孵育时间）
5. 轻轻摇动培养板，混匀
6. 即刻放进酶标仪测读：波长 450nm

注意事项

1. 本产品为 500 次操作
2. 操作时须戴手套
3. 如果 染色液（Reagent A）和 结合液（Reagent B）出现沉淀，置于 37℃恒温水槽孵育，轻度混匀，直至沉淀消失
4. 使用新鲜配制的染色工作液，务必不要超过 2 小时，且注意避光
5. 整个操作须无菌操作
6. 可以使用排枪操作
7. 建议 96 孔板里的细胞量在 5000 至 500000 范围为理想状态
8. 孵育时，须避光
9. 试剂使用后，即刻放回冰箱保存 10．不同细胞对于染料的敏感性不同，因此必要时，可以延长孵育时间，但最长不宜超过 24 小时11．某些低代谢细胞例如淋巴细胞、角化细胞（keratinocyte）、黑色素细胞（melanocyte）为不敏感细胞，

细胞量须在 25000 至 250000 范围为理想状态，并需要延长孵育时间

12. 对于敏感细胞，不要过度孵育，否则降低检测的敏感性
13. 背景吸收值为 0.1－0.2 为理想状态
14. 如果没有 450nm 波长的滤波器，可以使用 450 至 500nm 之间任一波长替代
15. 避免使用具有酚红的培养液；如果不可避免，必需设定培养液空白对照
16. 本公司提供系列细胞繁殖和毒性检测试剂盒

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海羽哚生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后， 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告） 与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。