冰冻切片线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRM）测定试剂盒

冰冻切片线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRM）测定试剂盒产品说明书
（中文版）

主要用途

冰冻切片线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRM）测定试剂是一种旨在通过四甲基罗丹明甲酯染料，选择性地聚集在线粒体内呈现荧光染色，其荧光的增强或减弱说明线粒体膜电位的变化，即内膜电负性的增高或降低，来分析冰冻组织样品线粒体内膜功能的完整性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种冰冻动物组织线粒体的功能检测。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老等的研究。产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作极为简易，性能稳定。

技术背景

四甲基罗丹明甲酯（tetramethylrhodamine methyl ester；TMRM），为罗丹明衍生物阳离子染料，作为电势测定（potentiometric）荧光探针：第一，具有亲脂性的，且细胞低毒和光稳定； 第二，与线粒体内膜负电极结合而聚集；第三，容易进入细胞及其线粒体。四甲基罗丹明甲酯进入细胞后，被细胞内酯酶切离，产生四甲基罗丹明。四甲基罗丹明进入线粒体后，被线粒体俘获，分布和结合在线粒体内膜上，呈现强烈荧光。线粒体膜电位的高低变化决定了TMRM的分布浓度。电位高，TMRM在线粒体的浓度高，显示为强力红色或桔红色；反之，TMRM弥散在胞浆内，荧光减弱表明线粒体膜电位受到损害。

产品内容

染色液（Reagent A） 微升
稀释液（Reagent B） 毫升
清理液（Reagent C） 毫升
强化液（Reagent D） 毫升
产品说明书 1份

保存方式

保存清理液（Reagent C）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；染色液（Reagent A）避免光照；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器
培养箱：用于染色孵育
（共聚焦）荧光显微镜：用于冰冻切片组织细胞线粒体荧光定性分析

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent A）置入冰槽里融化，稀释液（Reagent B）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出xx微升染色液（Reagent A）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升稀释液（Reagent B），混匀后，在冰槽里静置，并标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。

1. 准备5片待测的厚为10微米的未经固着处理的冰冻切片
2. 置于室温下，小心加上xx微升预冷的清理液（Reagent A），铺满整个切片表面
3. 小心移去切片上的清理液（Reagent A）

1. （选择步骤）加入xx微升强化液（Reagent D），轻轻混匀

4. （选择步骤）冰上孵育5分钟
5. 小心加上xx微升室温预热的染色工作液，铺满整个切片表面
6. 在37℃湿润培养箱里，孵育20分钟（注意：避免液体蒸发）
7. 小心移去切片上的染色工作液，避免光照
8. 小心加上xx微升清理液（Reagent A），铺满整个切片表面
9. 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
10. 放上盖玻片或封片（注意：检测前置于冰槽里）
11. 即刻在荧光显微镜下进行观察（滤波器激发波长540nm，散发波长580nm ）――可见

亮橘红色荧光；如果强度显著减弱，表明线粒体膜电位受到破坏

注意事项

1. 本产品为20次操作
2. 操作时，须戴手套
3. 染色工作液避免光照
4. 用户根据实际需求，按比例配制试剂用量
5. 根据不同组织类型，调整染色工作液的使用剂量（1：100至1：1000容量比），避免过度染色
6. 用户可以使用抗淬灭剂维持荧光持久（建议使用抗淬灭剂Ⅱ——12058.3）
7. 建议切片组织染色完成后，即刻进行荧光检测分析
8. 孵育时，避免光照
9. 本公司提供系列线粒体试剂产品

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺

上海羽哚生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

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