ATP生物发光法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒

ATP 生物发光法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途
ATP 生物发光法细胞繁殖与毒性定量检测试剂是一种旨在通过萤火虫荧光素酶反应系统，荧光素在酶的催化下，与 ATP 发生反应，产生生物光能，采用冷光仪测定其相对冷光单位的变化，来评价细胞生长状况的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物培养细胞应对药物、毒物、生物因子等外源刺激后的繁殖能力、生长抑制和死亡等检测。产品严格无菌， 即到即用，操作简捷，性能稳定，高度敏感。

技术背景

三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate；ATP）存在于所有代谢活跃的细胞内，是细胞活力的标志。一旦细胞凋亡或坏死，ATP浓度急遽下降。萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）是62 kd 的单体蛋白，催化ATP依赖性荧光素（luciferin）的氧化，经过电子转移，将化学能转化为氧化型荧光素（oxyluciferin）的光能，与ATP 量成线性正相关，通过冷光仪（560nm）检测，由此评价细胞活力。其反应方式为：

产品内容

裂解液（Reagent A） 毫升
反应液（Reagent B） 毫升
产品说明书 1 份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，严格避免光照和反复冻融，有效保证 6 月

用户自备

黑色 96 孔板：用于冷光检测操作的容器平式摇荡仪：用于混匀孵育反应
孔板离心机：用于澄清反应液冷光仪：用于样品冷光检测

实验步骤

实验开始前，从－20℃冰箱里取出试剂，置于室温下预热 15 分钟，避免光照；设置好冷光仪：温度 22℃， 1 秒延时（Delay），1 秒整合（Integration）检测。同时关上操作室的灯光。然后进行下列操作。

1. 准备黑色 96 孔细胞培养板的待测细胞（每孔 100 微升）：包括无细胞的培养液（背景空对照孔），未处理的对照细胞（样品对照孔），以及药物处理的细胞（处理样品孔），并做好标记（细胞密度为每孔 1 X 10³至 1 X 10⁴细胞）
2. 到规定的检测时间点，从湿润的细胞培养箱里取出待测的 96 孔细胞培养板（注意：确保细胞培养液维

持在 100 微升容量）

3. 室温下静置 5 分钟
4. 分别加入xx 微升 裂解液（Reagent A）
5. 室温下（22℃），置于平式摇荡仪孵育 10 分钟，速度为 50 RPM
6. 分别加入xx 微升 反应液（Reagent B）
7. 室温下（22℃），置于平式摇荡仪孵育 2 分钟，速度为 50 RPM，避免光照
8. （选择步骤）放进孔板离心机离心 5 分钟，速度为 250g
9. （选择步骤）分别移取 100 微升上清液转移到新的黑色 96 孔板里或使用冷光仪比色皿
10. 即刻放进冷光仪检测：1 秒延时，1 秒检测
11. 绘制细胞生长曲线：纵座标（Y 轴）为相对发光单位（RLU）；横坐标（X 轴）为细胞数或时间点或药物浓度
12. 计算细胞活力（％）

【（处理样品孔 RLU－背景空对照孔RLU）÷（样品对照孔RLU－背景空对照孔RLU）】 X 100％

注意事项

1. 本产品为 50 次操作
2. 所有操作均须无菌状态下进行
3. 操作时，须戴手套
4. 建议每个样品安排 3 个孔，即重复 3 次，计算时取其平均值
5. 每孔中的培养液需 100 微升，避免使用周边培养孔（常常液体蒸发而减少）
6. 反应液（Reagent B）具有光高度敏感性，因此整个操作须避光进行，避免反复冻融
7. 由于 ATP 无处不在，且热稳定性。建议使用的枪头、用具须严格无菌，避免重复使用；操作时避免污染试剂溶液，不得用手触摸试剂容器的内盖
8. 高于 10％血清浓度会干扰检测
9. 如果用户没有冷光仪，可以使用闪烁探测器（scitillation counter 或β计数器）替代，但敏感性较低10．如果样品 ATP 浓度较低，可以整合检测至 10 秒11．如果是注射式冷光仪，建议测试前后使用无离子水冲洗冷光仪注射（injector）管道 12．本公司提供系列 ATP 和细胞繁殖检测试剂产品

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海羽哚生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定， 保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。