水溶性四氮唑－8（WST-8） 比色法细胞繁殖测定试剂盒

CCK-8比色法细胞繁殖检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

CCK-8比色法细胞繁殖检测试剂是一种旨在通过四氮唑盐和电子偶联化合物在代谢旺盛细胞中的脱氢酶的作用下，产生水溶性桔黄色甲簪产物，作为检测信号来比色定量测定活体细胞繁殖和毒力影响的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。替代传统的同位素[³H]-thymidine检测的最佳选择。适用于各种生长中的动物、人体等细胞应对生长因子、细胞因子、营养元素和毒物、药物等发生的生长变化。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，一步操作，无需换液，检测敏感。

技术背景

作为细胞染色剂之一的水溶性四氮唑盐（2-(2甲氧基－4–xiao基苯基)-3-(4–xiao基苯基)-5-(2,4-苯二磺酸)-2H-四唑单钠盐；2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium，monosodium salt；WST-8）和电子偶联化合物一起可以自由地进入活细胞中。细胞繁殖快，其代谢旺盛，细胞线粒体内的脱氢酶活性增强，通过NADH还原并切离细胞浆中的染料为水溶性桔黄色甲簪产物而留存在于培养液中，在450nm波长下产生吸收峰：吸收值与细胞量成线性正相关。细胞可以继续进行培养。这是较之MTT、XTT、MTS和WST-1等染料检测更快速、更稳定、更简便、低毒性的方法。

产品内容

染色液（Reagent A） 毫升
终止液（Reagent B） 毫升
产品说明书 1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，避免光照和反复冻融，有效保证6月

用户自备

96孔细胞培养板：：用于细胞培养和染色的容器
酶标仪：用于比色分析

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下30分钟融化或放进37℃恒温水槽孵育5分钟融化，避免光照。然后进行下列操作。

操作一：贴壁细胞检测

1. 1. 从细胞培养箱里取出待测的96孔细胞培养板（10⁴细胞/孔）
   2. 确保96孔板中每一个孔含有100微升细胞培养液
   3. 小心加入xx微升GENMED染色液（Reagent A）到96孔板中每一个孔里
   4. 轻轻摇动培养板1分钟，确保染料均匀分布（注意：不要将液体溅到培养板的顶盖上）
   5. 放进37℃培养箱里，孵育2小时（注意：对于不敏感细胞或生长缓慢细胞，可以延长孵育时间至4小时）
   6. 轻轻摇动培养板1分钟，确保色素均匀分布（注意：不要将液体溅到培养板的顶盖上）
   7. 即刻放进酶标仪测读：波长450nm（注意：可以使用参考波长600至650nm）
   8. 放回37℃，5%CO2细胞培养箱里继续培养
   9. （选择步骤）加入xx微升GENMED终止液（Reagent B）到96孔板中每一个孔里
   10. （选择步骤）48小时内的任一时间放进酶标仪测读

操作二：悬浮细胞检测

1. 从细胞培养箱里取出待测的悬浮细胞
2. 分别移入100微升细胞悬液到96孔细胞培养板的每个孔里（10⁴细胞/孔）
3. 小心加入xx微升GENMED染色液（Reagent A）到96孔板中每一个孔里
4. 轻轻摇动培养板1分钟，确保染料均匀分布（注意：不要将液体溅到培养板的顶盖上）
5. 放进37℃培养箱里，孵育4小时
6. 轻轻摇动培养板1分钟，确保色素均匀分布（注意：不要将液体溅到培养板的顶盖上）
7. 即刻放进酶标仪测读：波长450nm（注意：可以使用参考波长600至650nm）
8. 放回37℃，5%CO2细胞培养箱里继续培养
9. （选择步骤）加入xx微升GENMED终止液（Reagent B）到96孔板中每一个孔里
10. （选择步骤）48小时内的任一时间放进酶标仪测读

注意事项

1. 本产品为500次操作
2. 操作时，须戴手套
3. 建议分装GENMED染色液（Reagent A），以免反复冻融
4. 整个操作须无菌操作
5. 建议96孔板里的细胞量在1000至25000范围为理想状态；毒力检测建议使用高密度细胞
6. 用户根据需要，可以建立已知细胞浓度的标准曲线
7. 建议建立空白对照（无细胞）、未处理细胞、药物处理细胞的检测体系
8. 避免使用还原剂
9. 孵育时，须避光
10. 不同细胞对于染料的敏感性不同，因此必要时，可以减少或延长孵育时间，通常为30分钟至4小时范围
11. 对于敏感细胞，不要过度孵育，否则降低检测的敏感性
12. 如果滤波器没有450nm，可以选择450至490nm之间的任一波长
13. 48小时内动态检测，避免加入GENMED终止液（Reagent B），可以选择不同时间反复测读
14. GENMED终止液（Reagent B）在于用户无法立刻检测，暂时保存已染色的样本，日后检测；保存时，置于室温，避光，避免液体挥发
15. 培养液中的酚红不会干扰测读
16. 背景吸收值为0.1至0.2为理想状态
17. 染料具无毒性，也不会使细胞着色，染色检测后，可以继续进行细胞培养或进行其它检测
18. 本公司提供系列细胞繁殖和毒性检测试剂盒

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海羽哚生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。