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- 2025年12月23日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 服务名称：
PCR相关检测
- 提供商：
富衡生物
荧光定量PCR是( realtime fluores-cence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。本公司提供利用荧光定量PCR的方法对样品中的基因表达情况进行相对定量或绝对定量分析的技术服务。
服务内容
相对定量 (mRNA表达量分析)
基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和内参基因同时分别进行定量，然后求出对于内参基因的目的基因的相对量。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较，可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析。内参基因通常选用表达量相对恒定的Housekeeping Gene，如：GAPDH、β-actin等。通过同时对内参基因的实时检测，可以对样品之间由于起始细胞数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正，达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目的。
绝对定量
绝对定量首先必须构建与检测样品目的基因具有相同序列的标准品，本公司服务内容为采用TA克隆的方法构建标准品。使用已知浓度的标准品制作5个点以上的标准曲线后，可以使用标准曲线对未知浓度的检测样品进行绝对量 (起始拷贝数)分析。
SYBR Green I 染料法
SYBR Green I 是一种与双链DNA小沟结合的荧光染料，SYBR GreenI只与双链DNA结合才能发出荧光，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，荧光信号与双链DNA分子数成正比，随着扩增产物增加而增加，荧光信号的强度代表了反应体系中双链DNA分子的数量。以SYBRGreen I作为检测信号的荧光定量PCR方法称为染料法。
TaqMan探针法
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，随着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基团不断积累，因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。以Taqman探针作为检测信号的荧光定量PCR方法称为探针法。
服务优势·利用ABI7500、Roche480荧光定量PCR仪，提供精确可靠的定量数据。
·成熟的引物和探针设计经验，预实验优化荧光定量PCR反应体系。
·本公司研发人员已具有七年荧光定量PCR技术服务经验，至今已承接荧光定量PCR技术服务检测样本4000余个，物种包括人、大鼠、小鼠、猪、鸡、鸭、狗、兔子、绵羊、山羊、桑叶、链霉菌、细菌、杨树和桑叶等20余种。。
样品要求
客户需提供组织、细胞、血液等样品材料，或纯化好的总RNA或总DNA，反转录好的cDNA样品，具体要求如下：
| 材料种类 | 样品要求 | 起始量 | 保存及运输方式 |
| 血液 | 新鲜血液及抗凝剂处理的全血 | 1ml | 加入Trizol-80℃贮存，干冰运输 |
| 培养细胞 | 离心收集的细胞 | 1x107 | |
| 动物组织 | 一般材料 | 100mg | -80℃或者液氮贮存，干冰运输 |
| 植物 | 一般材料 | 100mg | |
| RNA | OD260/OD280在1.9-2.1之间，完整性好 | >5ug | -80℃贮存，干冰运输 |
| DNA | OD260/OD280在1.7-1.9之间，完整性好 | >1ug | -20℃贮存，冰袋运输 |
| cDNA | 内参基因检测成功 | >20ul |
终产品
·一对引物(上游引物和下游引物)及其序列；
·完整实验报告；
·提供实验剩余组织及cDNA等样本。
服务说明
·客户提供基因序列。
·如因实验材料等非本公司原因造成某实验步骤失败，使实验提前终止，已启动的实验项目仍正常收费
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文献和实验POCT的相关技术 POCT 发展很快，主要得益于一些新技术的应用。 POCT 技术的基本原理大致可分为四类： （1） 把传统方法中的相关液体试剂浸润于滤纸和各种微孔膜的吸水材料内 ，成为整合的干燥试剂块 ，然后将其固定于硬质型基质上 ，成为各种形式的诊断试剂条。 （2） 把传统分析仪器微型化 ，操作方法简单化 ，使之成为便携式和手掌式的设备。 （3） 把上述二者整合为统一的系统。 （4） 应用生物感应技术 ，利用生物感应器检测待测物。 有关 POCT 的技术
Troubleshooting for PCR and multiplex PCR
Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles.* The 10x PCR buffer contains: 500 mM KCl; 100 mM Tris-HCl (pH 8.3); 15 mM MgCl2 (the final concentrations
PCR 是分子生物学科研人员必做的实验，为了扩增目的基因，经常要对 PCR 的体系进行“摸条件”，特别是一些 GC 含量高的目的基因或者 DNA 纯度不高的样本! “摸条件”成为 PCR 实验最费时费力的工作！ 虽然市场上有很多 PCR 的 MasterMix 试剂，将酶、dNTP、反应缓冲液混合在一起，很方便客户的使用，但仅仅是简单的混合，极少公司对MIX的应用范围进行广泛的实验和优化，只能做一些不复杂的 PCR。 百泰克通过长时间、无数次的实验优化，终于推出了适用范围广、稳定性良好
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