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M-MuLV 反转录酶

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    ♦ cDNA合成。
    ♦ RNA测序
    ♦RT-PCR




    概述：
    莫洛尼氏鼠白血病病毒(M-MuLV)反转录酶是一种RNA介导DNA聚合酶。该酶能以RNA(合成cDNA时)或单链DNA做模板由引物起始合成一个互补的DNA链(1-4) 。M-MuLV反转录酶无3´→5´核酸外切酶活性。


    来源：
    重组E . coli 菌株,含有从M-MuLV中克隆的反转录酶基因。


    反应条件：
    1X M-MuLV 反转录反应缓冲液[50 mM Tris-HCl (pH 8.3), 75 mM KCl, 3 mM MgCl2 ，10 mM DTT]，加入dNTPs(不随酶提供)，37°C或42°C温育。


    质保声明：
    无核酸内、外切酶和RNase污染。


    单位定义：
    1单位指以poly(rA)为模板、oligo(dT)为引物，在37°C条件下，10分钟内催化1 nmol的dTTP掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量。


    活性检测条件：
    50 mM Tris-HCl（pH 8.3）, 75 mM KCl,3 mM MgCl2 , 10 mM DTT,0.5 mM [3 H]-dTTP, 0.4 mM poly(rA)和oligo(dT)12-18。


    浓度：
    200,000 units/ml。


    贮存条件
    150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl (pH 7.6), 0.1mM EDTA, 1 mM DTT, 0.1% NP-40和50%甘油。-20°C贮存。


    参考文献：
    (1) Verma, I.M. (1975) J. Virol ., 15, 843–854.
    (2) Gerard, G.F. and Grandgenett, D.P. (1975) J. Virol ., 15, 785–797.
    (3) Roth, M.J., Tanese, N. and Goff, S.P. (1985) J. Biol. Chem ., 260, 9326–9335.
    (4) Sambrook, J. et al. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual , (2nd ed.), (pp. 5.52–5.55, 8.11–8.17). Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press.


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