phi29 DNA 聚合酶

♦ 极高的掺入率

♦ 超强的链置换能力

♦ 应用于需要强链置换和/或连续合成的复制反应

♦ 中温条件下高保真复制

从Bacillus subtilis 噬菌体phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶(1) 。除了具有3´→5´外切酶校读功能(3) ，还具有特殊的链置换和连续合成特性(2) 。

重组E. coli 菌珠，携带有噬菌体phi29 DNA 聚合酶基因。

♦ 应用于需要强链置换和/或连续合成的复制反应

♦ 恒温条件下，高保真复制

1X phi29 DNA聚合酶缓冲液 [50 mM Tris-HCl(pH 7.5 @ 25°C), 10 mM MgCl₂ , 

10 mM (NH₄ )₂ SO4,4mM DTT],加入200 μg/ml BSA。30°C温育。

1单位指30°C条件下，10分钟内使0.5 pmol的dCMP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

50 Tris-HCl (pH 7.5), 10 mM MgCl₂ , 4mM DTT, 0.2 mg/ml BSA, 0.01 mg/ml Hind III-消化的λDNA，0.2 μM dCTP 包括 32P dCTP、0.2 mM dGTP、0.2 mM dATP、0.2 mM dTTP和酶。

10,000 units/ml。

100 mM KCl, 10 mM Tris-HCl(pH 7.4), 0.1mM EDTA, 1 mM DTT, 0.5% Tween 20, 0.5% NP-40和50% 甘油。-20°C贮存。

65°C 10 分钟。

(1) Blanco, L. and Salas, M. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 81, 5325–5329.
(2) Blanco, L. et al. (1989) J. Biol. Chem ., 264, 8935–8940.
(3) Garmendia, C. et al. (1992) J. Biol. Ch em., 267, 2594–2599.