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phi29 DNA 聚合酶

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    ♦ 极高的掺入率

    ♦ 超强的链置换能力

    ♦ 应用于需要强链置换和/或连续合成的复制反应
    ♦ 中温条件下高保真复制


    概述：
    从Bacillus subtilis 噬菌体phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶(1) 。除了具有3´→5´外切酶校读功能(3) ，还具有特殊的链置换和连续合成特性(2) 。


    来源：
    重组E. coli 菌珠，携带有噬菌体phi29 DNA 聚合酶基因。


    应用：
    ♦ 应用于需要强链置换和/或连续合成的复制反应

    ♦ 恒温条件下，高保真复制


    反应条件：
    1X phi29 DNA聚合酶缓冲液 [50 mM Tris-HCl(pH 7.5 @ 25°C), 10 mM MgCl2 , 
    10 mM (NH4 )2 SO4,4mM DTT],加入200 μg/ml BSA。30°C温育。


    单位定义：
    1单位指30°C条件下，10分钟内使0.5 pmol的dCMP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。


    活性检测条件：
    50 Tris-HCl (pH 7.5), 10 mM MgCl2 , 4mM DTT, 0.2 mg/ml BSA, 0.01 mg/ml Hind III-消化的λDNA，0.2 μM dCTP 包括 32P dCTP、0.2 mM dGTP、0.2 mM dATP、0.2 mM dTTP和酶。


    浓度：
    10,000 units/ml。


    贮存条件：
    100 mM KCl, 10 mM Tris-HCl(pH 7.4), 0.1mM EDTA, 1 mM DTT, 0.5% Tween 20, 0.5% NP-40和50% 甘油。-20°C贮存。


    热失活：
    65°C 10 分钟。


    参考文献：
    (1) Blanco, L. and Salas, M. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 81, 5325–5329.
    (2) Blanco, L. et al. (1989) J. Biol. Chem ., 264, 8935–8940.
    (3) Garmendia, C. et al. (1992) J. Biol. Ch em., 267, 2594–2599.


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