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感受态细胞以独特的预装于电击杯的方式提供可以最大程度地简化电击过程的繁琐步骤。EasyShock 10B 感受态细胞由0.1cm 电击杯和20 μl of EP-MaxTM 10B 电击感受态细胞组成。优点包括:
• 操作过程简化:只有一个加样步骤,无需其他小管
• 转化效率卓越:>1 x 108 CFU/反应( 足够量DNA ), 0.5-1.5 x 1010 CFU/μg pUC19 DNA
• 包装完善紧凑:节约冷冻空间
另外,EasyShock 10B 感受态细胞具备所有EP-MaxTM
10B 电击感受态细胞的优点
• 通过lacZΔM15 基因的α互补进行蓝白斑筛选
• 限制性系统突变用于克隆甲基化DNA
• 可以用于大片断插入质粒构建(最大到37Kb)
EasyShock 10B 感受态细胞中使用的EP-Max 10B 电击感受态细胞。
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文献和实验体外连接的DNA重组分子导入合适的受体细胞才能大量增殖。为了提高受体菌摄取外源DNA的能力,提高转化效率以获得更多的转化子,人们摸索出了不同的方法处理细菌,使其处于感受态。目前主要采用电转化法和CaCl2法将外源DNA导入受体细胞中,并需要相应地制备电转化感受态细胞和CaCl2感受态细胞。实验目的:学习感受态细胞的制备过程实验材料:大肠杆菌菌株DH5a或DH10B实验原理:电转化法是利用瞬间高压在细胞上打孔,因而需用冰冷的超纯水多次洗涤处于对数生长前期的细胞,以使细胞悬浮液中应含有尽量少的导电
PUC 质粒并且做「蓝白斑」筛选。 保存: ①为避免反复冻融,建议小体积分装制备好的感受态(如 100μL / 管),分装所用的 EP 管需提前灭菌并预冷(4℃ 或 - 20℃),减少细胞温度波动; ②感受态细胞制备后,需立即用液氮或干冰 - 乙醇浴快速冷冻(1-2 分钟内降至 - 80℃ 以下),冻结后再转移至 - 80℃ 冰箱; ③-80℃ 低温保存,最大限度降低细胞代谢和冰晶形成对细胞膜的损伤,通常能稳定保存 6-12 个月(不同菌株略有差异),保存期间保证温度稳定,避免反复冻融;
一、CaCl2 感受态细胞的制备的实验步骤 1.前夜接种受体菌( DH5α或 DH10B),挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜(约16小时); 2.取 1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中,在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时(250-300rpm); 3.将 0.1M CaCl2 溶液置于冰上预冷; 以下步骤需在超净工作台和冰上操作 4.吸取 1.5ml培养好的菌液至1.5ml离心管中,在冰上冷却10分钟; 5.
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