DH10B感受态细胞

特别提示：包括DH10B感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：DH10B感受态细胞
英文名称：DH10B Competent Cells
产品货号：MT0063
产品规格：10×100μl

大肠杆菌经Ca离子处理后可摄取外源DNA(Plasmid、Phage DNA)，处于这种状态的细胞称作感受态细胞(Competent Cells)。在进行基因重组时，使用感受态细胞的转化实验应用十分广泛。制作基因文库、重组质粒体以及进行亚克隆实验时，特别是目的基因含量十分低的情况下时，使用高效的感受态细胞十分重要。使用pUC57质粒检测该DH10B感受态细胞，转化效率可达10⁷～10⁸。在-70℃下保存数月转化效率不发生明显降低。

操作方法：
1．取出感受态细胞，置于冰上5分钟，解冻。
2．向感受态细胞中加入1-10μl连接产物，轻弹离心管底部混匀，冰上放置30 min。
3．置于42℃热激60s后，迅速置于冰上急冷2分钟。
4．向热激完毕的感受态细胞中，加入700μl经37℃预热的LB(或SOC)培养基(不含抗生素)，37℃振荡（225 rpm）培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5．室温4,000 rpm离心5分钟，弃去700μl上清后，用剩余100μl培养基重悬细胞并涂布到含相应抗生素的LB琼脂平板表面。
6．将平板置于37℃培养，12~14小时后可出现菌落。

注意事项：
1．感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。
2．所有操作均需注意无菌操作。
3．pUC18 plasmid 标准品（0.2 ng/μl），含有氨苄青霉素抗性，作为阳性对照使用，每次转化5μl，可以得到约100～1000个克隆。

常见问题分析：

问题：转化具有氨苄青霉素抗性的平板出现卫星菌落
原因分析：有些载体带有β-内酰胺酶的基因，表达出β-内酰胺酶，它可以破坏氨苄青霉素。当细菌培养时间过长，β-内酰胺酶积累过多，就会使氨卞青霉素失效，导致不含质粒的空菌落大量生长，这就是卫星菌落。由于生长时间较短，故卫星菌落一般较小，星状分布，环绕在中心菌落周围，卫星菌落由此得名。在克隆过程中挑取中心的大的克隆子一般对结果不会有什么影响。
解决方法：
1．通常氨苄青霉素抗性的平板推荐使用浓度为200ug/ml；
2．培养时间通常12个小时即可看到阳性克隆，培养超过16h后，易出现卫星菌落，如出现卫星菌落挑取中心大克隆，不影响实验结果。

储存条件：-80℃可保存一年。

除了DH10B感受态细胞,，我公司还供应以下相关产品：
 

货号	名称	规格
BTN130813	DNA磷酸化试剂盒	20次
BTN140374	大肠杆菌DH10B化学感受态细胞	0.1mL*10
BTN130564	大肠杆菌Tuner(DE)plysS感受态细胞	0.1mL*10
BTN140386	酿酒酵母AH109化学感受态细胞	10×100μL
BTN120700	利福平溶液	10mL
BTN120681	两性霉素B	1mL
BTN60302	硫酸卡那霉素干粉	1g
YT001	质粒小量抽提试剂盒	50次|200次
YT468	C端YFP标签融合蛋白质粒(黄色荧光蛋白)	1μg
ALH355	一管式定点突变试剂盒	10次|20次
SY0013	XL10化学感受态细胞	100μl×10管
SY0295	pUM19-T Vector TA克隆载体	1μg
JN0127	BL21(DE3)感受态细胞(pG-TF2分子伴侣)	100μl×10
QN1057	20×SSC缓冲液，pH5.3	100mL|500mL
MQ0001	DH5α化学感受态细胞	20×100μl/100×100μl
MQ0043	Rosetta(DE3)化学感受态细胞	10×100μl/50×100μl
MQ0065	AH109酵母感受态细胞	10×100μl/50×100μl
GL2118	Lipofect脂质体转染试剂	0.5ml|1ml|5×1ml