TUNEL染色/凋亡染色

TUNEL 染色： 是一种特异性的、基于生物化学原理的染色技术，专门用于在细胞或组织样本中标记和检测凋亡细胞。

原理

1、凋亡的核心特征 - DNA 断裂： 在细胞凋亡的执行阶段，细胞内源性的核酸内切酶（如 CAD/Caspase-Activated DNase）会被激活。这些酶专门切割 DNA，通常在核小体之间的连接处（linker DNA）进行切割，产生大量带有 3'-羟基末端 的 DNA 双链或单链片段。

2、TdT 酶的独特功能： 末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT) 是一种不需要模板的 DNA 聚合酶。它的独特之处在于能够直接将脱氧核苷酸（如 dUTP）添加到 DNA 片段的 3'-羟基末端上，无论这些末端是平末端、粘性末端还是单链缺口。

3、标记 dUTP： 在 TUNEL 反应中，提供给 TdT 酶的 dUTP 分子上预先连接了可检测的标记物。

4、标记反应： 将含有 TdT 酶和标记 dUTP 的反应混合物加到经过适当固定和通透处理的细胞或组织切片上。TdT 酶会识别凋亡细胞 DNA 断裂产生的 3'-OH 末端，并将大量标记的 dUTP 添加到这些末端，形成一条长的标记多聚核苷酸链。

5、检测： 根据标记物的不同进行检测：

• 荧光标记： 直接在荧光显微镜下观察，凋亡细胞的细胞核会发出特定波长的荧光（绿色最常见，如 FITC）。
• 酶标显色： 如果使用生物素或地g辛标记，需要先加入相应的酶联链霉亲和素或酶联抗体，再加入显色底物（如 DAB 产生棕色沉淀，AEC 产生红色沉淀）。在普通光学显微镜下观察，凋亡细胞的细胞核会被染上特定的颜色。

TUNEL 染色优势

1. 高特异性： 直接检测凋亡的核心生化事件——DNA 断裂，特异性较高。

2. 高灵敏度： 能检测到非常早期的凋亡细胞（在形态学发生显著改变之前）。

3. 形态学关联： 可以在完整的细胞或组织结构背景下定位凋亡细胞，便于观察凋亡发生的部位及其与周围组织的关系。

4. 适用性广： 可用于各种样本类型（培养细胞、组织切片、甚至某些体液细胞）和多种物种。

5. 可定量： 通过计数阳性细胞或使用图像分析软件测量荧光强度/染色面积，可以对凋亡水平进行相对定量。

6. 技术成熟： 有大量文献支持，操作流程相对标准化，且有多种商品化试剂盒可用。

服务内容：天贺生物提供TUNEL检测服务和罗氏tunel检测试剂盒。
客户提供：石蜡切片/冰冻切片均可。
我们提供：染色后的切片、完整实验报告。