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- 病理服务—TUNEL染色（DAB\荧光）
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- 2026年01月06日
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- 服务名称：
病理服务—TUNEL染色（DAB\荧光）
- 提供商：
北京永欣康泰科技发展有限公司
1、实验条件：石蜡（冰冻）包埋、 切片、Tunel试剂盒（罗氏Roche）
2、先进行预实验，客户满意后，再进行正式实验，周期： 2-3周
C、结果提供： 玻片、蜡块。如需拍照，可按照要求拍照
D、客户提供： 组织样本
E、样本要求：取材迅速、保持组织新鲜，立即放入固定液（固定液用10%福尔马林液，体积为组织块的10倍以上）中，含血较多的组织用PBS液或生理盐水冲洗后直接放入固定液中
实验操作流程：
1．石蜡切片，常规脱蜡至水；石蜡切片4um贴在涂有切片粘合剂的载玻片上，58。C烤24h，常规脱蜡至水，二甲苯Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ 各10分钟，无水乙醇，95%，85%，75%乙醇，各2分钟，水洗2分钟
2．0.3%H2O2作用 30min,室温，PBS洗3min×3次
3．Proteinase K 20ug/ml 37℃ 20min
4．PBS洗3min×3次
5．0.1%Triton×100 PBS洗3min×3次
6．PBS洗3min×3次
7．TUNEL混合液---1ml Tunel缓冲液中加入10ul b-11-DUTP, 10ul TDT, 37C 1h,室温1h
8．PBS洗3min×3次
9．Streptavidin-HRP 1:400 37C 30min
10．PBS洗3min×3次
11．0.04%DAB+0.03%H2O2显色10min，流水洗
12．苏木素衬染1min，盐酸乙醇分化，水洗
13．常规树脂封片
实验结果观察：阳性结果为棕黄色（核）或棕褐色，背景呈紫蓝色。
实验室可构建的动物模型 ：
| 构建动物模型名称 | 适用范围 |
| 1、裸鼠肿瘤（皮下、原位）动物实验 | 胰腺、肝、胃原位接种、皮下接种 |
| 2、兔 腹主动脉、颈动脉硬化（球囊法）模型 | 稳定制备 颈动脉、腹主动脉硬化模型 |
| 3、心肌缺血、大、小鼠、兔、小型猪心电图、心脏超声、病理评价 | 心肌缺血及再灌注、心梗、血压测定（麻醉及清醒状态下）等 |
| 4、Ⅰ、Ⅱ型糖尿病大小鼠、兔动物模型 | 高脂诱导+STZ制备糖尿病模型及糖尿病并发症研究，药效评价 |
| 5、骨质疏松大鼠、小鼠实验（去势） | 老年性骨质疏松相关疾病临床前药效评价 |
| 6、股骨头坏死、骨缺损、鼠、兔模型 | 镇静、镇痛动物模型，行为学模型制作及药物筛选 |
| 7、Apoe小鼠动脉粥样硬化整体实验 | 高脂饲养、取材、病理实验、大体染色等 |
| 8、急性粒细胞白血病动物实验 | |
| 9、肾结石快速成模大鼠模型 | 乙二醇致大鼠肾脏草酸钙结石模型 |
| 10、眼科大小鼠模型、视网膜铺片、 玻璃体腔内注射 |
眼科疾病模型及相关检测方法 |
| 11、脑缺血、帕金森、脑出血动物模型 | 脑病实验、颅内注射、技术成熟稳定 |
| 12、肾脏缺血、肾移植、肾衰动物模型 | 肾脏缺血、肾移植、肾衰竭实验及检测平台 |
检测平台
| 服务项目 | 服务承诺 | 服务周期 | 样本种类 |
| 病理切片、免疫组化 | 染色结果照片 | 2-3周 | 组织 |
| Western blotting | 胶片 | 1-2周 | 蛋白样本或组织 |
| 流式细胞服务 | 散点图、分析数据、设备信息等 | 1-2周 | 血样、骨髓等 |
| 细胞凋亡检测 | 凋亡图、数据分析 | 细胞 | |
| RT-PCR | 扩增图 | 1-2周 | RNA或组织 |
| 血压监测（无创式） | 实时血压数据 | 大、小鼠 |
备注：以上只是常规制备的动物模型种类，如果有其他动物模型制备的需求，也可以按照方案进行定制
永欣康泰坚持：
上门取样、客服专人跟进项目进度、随时汇报实验进展、为您有效降低科研成本、缩短实验周期。
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拓宽思路和眼界 积极探索新的模型构建方法
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文献和实验一、TUNEL法的实验原理 细胞发生凋亡时, 染色体DNA双链或单链断裂产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。由于正常的或正在增殖
亲和素与 dTUTP 上的 biotin 结合（每个链霉亲和素至少可以再结合 3 个 biotin 分子），最后用 DAB、过氧化氢与 SP 上的辣根过氧化物酶 HRP 发生氧化、环化反应，形成苯乙肼聚合物而呈现棕褐色，最终通过计数每张切片上不同视野中 TUNEL 阳性细胞的比例来判断细胞凋亡发生情况。（小编碎碎念：掌握原理是做好实验的先决条件，不少人还以为是抗体抗原反应呢） TUNEL 实验中关键步骤 1. 充分脱蜡和水化。脱蜡可以先 60ºC 20 min，再用使用二甲苯两次 5-10 min
位。 IF（免疫荧光检测）是采用荧光素标记物作为探针，形成的抗原抗体复合物上带有荧光素，在荧光显微镜下，受激发光的照射后发出一定波长的荧光，从而对细胞、组织中的抗原进行定位或定量。 表 1 IHC/ICC与IF特点对比 IHC/ICC 与 IF 染色中使用的抗体主要为一抗与二抗，根据是否选用二抗以及二抗标记物类型可形成多种不同的检测系统。信号放大是免疫组化实验中的重要步骤，信号放大可以使目标蛋白质的信号从微弱到明显，从而更容易被观察和定量。现有的信号放大技术多为链霉亲和素-生物素法，该方法基于链酶亲和
