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瞬时转染
- 提供商:
凯基生物
| 瞬时转染 | |
| 实验目的:将质粒携带的目的基因导入真核细胞,是目的基因表达蛋白 实验原理:脂质体为人工膜泡,可作为体内,体外物质转送载体。将需转移的DNA或RNA包裹于质脂体,由于质脂体具有磷脂双层与胞膜相似,因此,可与细胞膜融合,将DNA转入宿主细胞。 实验仪器:超净工作台、CO2培养箱、生物倒置显微镜 实验内容与方法: 瞬时转染: 1.细胞准备:细胞接入6孔板,待细胞汇合至80,更换不完全培养基,饥饿24h; 2.转染液制备:分别稀释质粒和转染试剂; 3.转染制备:混合质粒和转染试剂; 4.转染。 稳定转染:瞬时转染后筛选单克隆,筛选出高表达的细胞株。 客户提供实验信息: 1、实验信息(客户提供): 样品信息 (包括来源、全称等) 2、实验材料提供 (1)样本材料 生长状况良好的宿主细胞株,并提供细胞特性、培养条件及相关注意事项。 (2)试剂 提供Lipofectamine 2000与质粒,并说明质粒大小,浓度,抗性,拷贝数等相关背景资料。 服务周期:瞬时转染:2周;稳定转染:2月 结果提交:提交实验报告书(实验试剂与设备、实验过程、结果分析、原始数据、细胞图片等);转染细胞株 |
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文献和实验一般情况下,瞬时转染是将 DNA 导入真核细胞的方式之一。在瞬时转染中,重组 DNA 导入感染性强的细胞系以获得目的基因暂时但高水平的表达。转染的 DNA 不必整合到宿主染色体,可在比稳定转染较短时间内(最多一周左右)收获转染的细胞,并对溶解产物中目的基因的表达进行检测。如果过表达基因用质粒,如果敲降用的是 siRNA(在 microRNA 实验中,过表达用的是 mimics,敲降用的是 inhibitor)。通过瞬时转染,将目的基因敲降或者过表达(gain and loss 实验),观察下游
孔、FuGENE6等) 3)48小时以后鉴定目的基因的表达情况。 前期准备: l构建好的外源基因载体,或目的基因基本信息。 l待转染的细胞系(1×106个细胞,可传代,倍增时间小于48小时)以及细胞培养条件的说明。 l若需要检测靶基因的表达,请提供相应抗体。 结果呈现: 构建好的瞬时转染细胞及相关的外源基因表达分析。
wzdalxl1314 请教 瞬时转染miRNA的寡聚核苷酸到血管平滑肌细胞中用什么转染试剂好? 请大家帮帮忙,谢谢。 wzdalxl1314 大家的miRNA序列都是哪里设计的 ?是上海吉玛公司的吗? ameng2011 我们实验室做脐动脉的平滑肌是用lipo2000 英骏公司的 本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验
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