- ¥5000 - 8000
- 筛选得到可稳定表达目的蛋白；筛选得到稳定沉默特定基因的细胞株。
- 不限
- 2026年11月08日
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- 服务名称：
稳定细胞株构建
- 提供商：
广州伯信生物科技有限公司
建立稳定细胞株，一种方法是根据基因载体的抗性标志选用筛选药物。最常用的抗性标记基因有潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)和嘌呤霉素(puromycin)；另一种方法是荧光筛选，通过克隆化的方式来筛选。
目前构建稳定细胞株常用慢病毒方法：利用慢病毒整合到宿主基因组的特性来筛选稳定株（可以在短时间内获得高效率的稳定细胞株）。
客户提供
① 待稳定转染细胞株；
② 稳转质粒（可由伯信提供服务）；
③ 慢病毒（可由伯信提供服务）；
伯信提供
① 稳定转染细胞株，≥5×106细胞；
② 目的基因稳定表达或沉默载体构建报告（实验仪器、试剂、方法、结果、结论）；
③ 目的基因稳定表达或沉默效率验证报告（实验仪器、试剂、方法、结果、结论）。
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文献和实验想长期表达某个基因，但它一高表达细胞就死、一过表达表型全是"中毒"——这时候很多老师会想到诱导表达系统： Tet 诱导稳定细胞株（Tet-On）怎么构建？和普通稳转株差在哪？诱导倍数怎么验证？ 先说结论： Tet 诱导稳转株的核心是把"表达开关"装进稳转系统：细胞先稳定表达调控蛋白（Tet-On 的 rtTA），再引入由 TRE 应答元件控制的目的基因。平时不表达或低表达，加入诱导剂（多西环素 doxycycline）后才按剂量诱导表达。构建框架仍是"感染 → 筛选 → 验证 → 冻存
想给内源基因加上荧光标签、引入点突变，或者在特定位点插入报告基因，就需要 CRISPR 敲入（Knock-In, KI）： CRISPR KI 稳定细胞株怎么构建？为什么 KI 比 KO 难、周期更长？怎么验证敲入成功？ 先说结论： KI 的核心是"Cas9 切割 + 同源重组修复（HDR）"：用 sgRNA 引导 Cas9 在特定位点切割，同时提供带同源臂的修复模板（供体），把目的序列精确整合到基因组特定位点，再经单克隆分选和 PCR+测序验证，得到基因型明确的 KI 稳转株。与 KO
做基因功能缺失研究，敲低（KD）只能把 mRNA 打下来一部分，很多老师会直接上 CRISPR： CRISPR 敲除（KO）稳定细胞株到底怎么构建？sgRNA 怎么筛？单克隆怎么挑？"敲除成功"的验证标准是什么？ 先说结论： 标准路线是"Cas9 + sgRNA 使靶基因移码 → 单克隆分选 → PCR 测序验证基因型 → 蛋白水平确认敲除"，最终交付 100% 纯合子 KO 稳转株。KO 和 KD 的最大区别是：KO 做的是基因编辑，必须做基因型验证，且通常以单克隆形式交付。 方案确认
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