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- 稳定细胞株构建
- 中国
- 2025年12月30日
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研载生物
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稳定细胞株构建
稳定细胞株构建
一、服务简介
构建稳定细胞系的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选。最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素(puromycin)，常用G418来代替新霉素进行选择性筛选，筛选得到可稳定表达目的蛋白，或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。
慢病毒几乎可以感染所有种类的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达，因此，慢病毒常用于制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株。
研载生物制备的带puromycin抗性的慢病毒，在感染目的细胞后，可通过加入puromycin进行选择性筛选，从而获得稳定表达shRNA或者特定基因的细胞株。
二、服务优势
△先进的慢病毒包装技术
△丰富的细胞培养经验
△专业的技术服务团队
△优质的服务质量
三、服务流程
1. 客户提供：目的基因信息、目的细胞（可代购）及信息。
2. 本公司提供：目的细胞预感染、病毒载体的构建、病毒包装与纯化、滴度检测、稳定株筛选及鉴定，客户得到目的细胞稳定株及对照稳定株、完整实验报告。
3. 实验周期：60个工作日。
备注，实验服务报告内容：
△本公司构建载体的，提供载体及带有载体的菌液各一份及相关的序列信息。
△构建成功的稳定细胞株，转染后需要检测的，参考相关实验服务。
△构建稳定细胞株实验所需试剂耗材、仪器设备信息、实验方法各一份。
△其他与构建稳定细胞株技术服务相关的信息。
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文献和实验w_dennis 请教各位高人前辈，有做过基因的部分核苷酸缺失后，回补株构建实验吗？如何操作？ 请教下pBAD/gⅢ和pBR322质粒构建回补株的原理？叩谢！！:) woxingwosu 看看这个有没有帮助了： http://journal.shouxi.net/qikan/article.php?id=534304 w_dennis 谢谢，请问有pBAD/gⅢ和pBR
用慢病毒筛选稳定细胞株，以G418筛选方法为例，筛选出稳定整合Neomycin抗性基因的细胞系。 A 、 G418 抗生素最优浓度筛选 每种细胞对抗生素的敏感性不同，因此，准备建立稳定细胞系之前，需要确定能够在10-14天杀死细胞的最佳浓度。 方法如下 ： 1、将细胞稀释到1000个细胞/mL，接种到24孔板，每孔1ml。 2、接种后第二天在100ug/mL~1mg/mL的G418浓度范围内进行筛选。3、每隔3天跟换1次培养液，保持G418浓度不变。 4、选择出
1. 2 稳定转染细胞株的构建 原理： 稳定转染，就是转染的质粒DNA 整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可 长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代，从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。 应用： 观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能（稳定，可长期进行研究） 一般流程：
