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- 2025年07月14日
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激酶活性测定
激酶活性测定的原理为，通过检测溶液中剩余ATP的量，从而检测激酶的活性。该激酶活性测定实验可适用于任何酶/底物反应，包括化合物、短肽、蛋白、脂或糖，可用于96孔板或384孔板的检测。该实验可操作性强，底物不需要同位素标记，可获得高稳定性荧光，半衰期可达5小时，可有效的区分ATP竞争性和非竞争性抑制。该实验还可用于高通量筛选化合物库，获得可靠的、重复性好的实验数据，Z’factor值>0.7。荧光信号的强度与剩余ATP的量成正比，与激酶的活性成反比，与化合物抑制酶活性的强度呈正比。
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文献和实验网络 三、激酶活性的测定 信号转导过程中往往涉及多种激酶的活化，因而对这些激酶活性的测定可以作为信号转导研究中的一种重要指标。常见激酶活性的测定有PTK、PKC及PI-3K等。均有商品化的 试剂 盒。检测原理是根据激酶可以催化特定底物发生磷酸化，外源加入 32 γ-ATP，通过分离反应产物后测定
【求助】AKT激酶活性测定和磷酸化AKT水平测定能说明同一个问题吗
jasedm 看到文献好多都说，某蛋白被磷酸化，其活性增高，继而磷酸化下游的信号分子。 AKT激酶活性测定和Western blot检测其磷酸化水平 两者都能说明AKT的活性吗？有什么不同吗？ 两者有没有可能测定出来的结果不同？ 例如说AKT磷酸化水平没变化，但是激酶活性检测结果是活性降低？ AKT磷酸化就代表它有活性吗？ 谢谢高手指点
紫石榴 最近在研究心肌缺血对某microRNA的调控，有文献报道在原代细胞中随时间下调，我用的是H9c2心肌细胞系做的，想做个验证，顺便找最佳干预点。考虑经费问题，所以先用RT-PCR的方法做趋势，再上real time。我是提取总RNA，定量后（量和纯度都还好），用过茎环引物逆转录，再PCR电泳的，但做出的结果与设想趋势不符，且重复性很差，不知道哪里不对。麻烦高手指导下。 版主zhujoker留言: RT-PCR这种半定量是不可
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