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        【求助】关于microRNA测定问题

        丁香园论坛

        1289
        最近在研究心肌缺血对某microRNA的调控,有文献报道在原代细胞中随时间下调,我用的是H9c2心肌细胞系做的,想做个验证,顺便找最佳干预点。考虑经费问题,所以先用RT-PCR的方法做趋势,再上real time。我是提取总RNA,定量后(量和纯度都还好),用过茎环引物逆转录,再PCR电泳的,但做出的结果与设想趋势不符,且重复性很差,不知道哪里不对。麻烦高手指导下。
        版主zhujoker留言:
        RT-PCR这种半定量是不可能准确的,你的预试验没有任何意义!
        其实做realtime的重复性就是不很好,所以每一次你一定要注意到溶解曲线的问题,当溶解曲线很好时,你的结果就稳定了。
        RT-PCR条件是否稳定?这个问题你可以考虑一下。因为我看到过。然后,你看的文献权威性怎么样?有时候不要缺乏自信,很多新的理论与发现点都是在不经意中找到的。good luck !
        谢谢,我在试试哈

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        【求助】关于microRNA测定问题

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