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- 2025年07月16日
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上海安普生物
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药物对细胞凋亡的影响
上海安普生物科技有限公司提供药物对细胞凋亡实验
【实验目的】通过不同的实验方法，检测药物对细胞凋亡的影响。
【实验内容】
（1）琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder。
（2）Western blot 检测凋亡蛋白酶底物PARP的剪切。
【实验方法】分述如下：
1、DNA Ladder
原理
细胞核染色质DNA 断裂是细胞凋亡的标志特征。在细胞发生凋亡时，核酸内切酶被激活，选择性降解染色质DNA，形成50-300 kbp 的大片段，并进而在核小体连接处断裂，形成180-200 bp 或其整倍数的DNA片段，这些DNA 片段可从细胞中提取出来，通过琼脂糖凝胶电泳，溴化乙啶染色呈现为梯状条带（DNA Ladder），并据此判断细胞凋亡产生。
原理
聚（腺苷二磷酸-核糖）多聚酶（PARP）为一种依赖Zn2+ 的真核DNA结合蛋白，可特异性地识别DNA断裂末端并结合，是一种重要的DNA修复酶。在细胞凋亡发生的早期， PARP是caspase家族（如caspase3 和caspase7）的作用底物，后者可使PARP的DNA 修复功能丧失。Caspase可将 113kD的PARP水解为89kD和24kD的两个片断。本方法主要
是运用抗PARP抗体，用蛋白印迹法（western blotting）检测PARP 89kD的裂解片断以及113kD完整的PARP蛋白，以作为细胞凋亡早期的标志物。可检测3x105 凋亡细胞的PARP裂解片断。
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