CCK-8实验

专业承接各类裸鼠、大鼠、小鼠、兔等动物模型建立以及后续检测服务，模型建立包含裸鼠皮下瘤、原位瘤、糖尿病模型、胃炎模型、急性肺损伤、肺纤维化、子宫内膜异位、白癜风、痛风、骨缺损、肝纤维化、关节炎、脓毒症、支气管哮喘、抑郁症、白血病、脑缺血再灌注、骨质疏松、酒精性肝病、学习记忆障碍、胃溃疡、急性心肌缺血、感染性休克、肝硬化等动物实验模型建立，以及后续各项检测。

  在生命科学研究领域内，进行实验研究所需要的基本条件可以总括为：实验动物、设备、信息和试剂。实验动物作为生命科学研究中的基本要素之一，在很多领域的科学研究中，充当着非常重要的安全试验、效果试验、标准试验的角色，尤其在药物有效性和安全性评价中发挥着不可或缺的作用。

  安徽乐奥贝生物技术公司可以独立开展包括大鼠、小鼠、裸鼠、豚鼠、兔等常见实验动物在内的动物造模及相关实验，现已熟练掌握近30余种不同类型动物模型的造模方法。

1. 实验原理
   • CCK - 8（Cell Counting Kit - 8）试剂中主要成分是 WST - 8（2 - (2 - 甲氧基 - 4 - C₆H₅NO₃) - 3 - (4 - C₆H₅NO₃) - 5 - (2,4 - 二磺酸苯) - 2H - 四唑单钠盐）。在电子载体 1 - 甲氧基 - 5 - （1 - Methoxy PMS）的作用下，WST - 8 能被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲臜产物。生成的甲臜量与活细胞数量成正比，因此可以通过酶标仪在 450nm 波长左右检测其吸光度（OD 值），从而反映细胞的增殖或活性状态。与 MTT 实验相比，CCK - 8 实验的产物是水溶性的，不需要像 MTT 实验那样用有机溶剂溶解，操作更简便。
2. 实验准备
   • 细胞培养
     • 首先要选择合适的细胞系，例如研究细胞药物敏感性时，若针对肿瘤研究，可选择如 HCT - 116（人结直肠癌）、SK - OV - 3（人卵巢癌细胞）等细胞系。细胞在合适的培养基（如含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基或 RPMI - 1640 培养基）中，于 37℃、5% CO₂条件下培养至对数生长期，因为这个时期细胞活力和增殖状态良好，适合进行实验。
   • 试剂准备
     • CCK - 8 试剂：购买的 CCK - 8 试剂一般是浓缩液，按照说明书用无血清培养基进行稀释后使用，通常稀释比例为 1:10 左右。例如，如果购买的是 10× 浓度的 CCK - 8 试剂，那么每 100μL 的试剂需加入 900μL 的无血清培养基进行稀释。
     • 药物或处理因素：如果是研究药物对细胞的影响，要准备好相应的药物，并用合适的溶剂（如 PBS 或培养基）溶解，配制成不同浓度的溶液。
3. 实验步骤
   • 细胞接种
     • 把处于对数生长期的细胞用胰蛋白酶消化，制成单细胞悬液。按照一定的细胞密度接种到 96 - 孔板中，细胞密度因细胞类型和实验目的而异。一般来说，细胞数量可以在 5×10² - 1×10⁵个 / 孔之间。例如，对于生长迅速的细胞，可接种 5×10² - 1×10³ 个 / 孔；对于生长缓慢的细胞，接种密度可能需要提高到 1×10⁴ - 1×10⁵个 / 孔。接种后，将 96 - 孔板放入 37℃、5% CO₂培养箱中培养一定时间，使细胞贴壁，通常需要 1 - 3 小时。
   • 药物处理或干预
     • 根据实验设计对细胞进行药物处理或其他干预。如果是研究药物的细胞毒性，将不同浓度的药物溶液加入孔板中的细胞，每个浓度设置 3 - 6 个复孔。药物作用时间根据药物性质和实验目的而定，从数小时到数天不等。比如，研究抗生素对细菌细胞的作用，作用时间可能是 6 - 24 小时；研究抗肿瘤药物对肿瘤细胞的作用，可能需要 48 - 72 小时。
   • CCK - 8 添加与孵育
     • 药物处理结束后，每孔加入稀释后的 CCK - 8 试剂，一般加入量为 10 - 100μL（具体用量参考试剂说明书），然后将 96 - 孔板放入 37℃、5% CO₂培养箱中孵育 1 - 4 小时。在这个过程中，活细胞中的脱氢酶会将 CCK - 8 试剂还原为甲臜。
   • 检测与结果分析
     • 孵育结束后，直接使用酶标仪在 450nm 波长处（参考波长可以是 600 - 650nm）检测各孔的吸光度（OD 值）。计算细胞活力或增殖率时，通常以未处理组（对照）的 OD 值为参照，比如计算细胞活力（%）=(药物处理组 OD 值 / 对照组 OD 值)×100%。通过绘制药物浓度 - 细胞活力曲线等方式，可以直观地分析药物对细胞的影响。
4. 实验注意事项
   • CCK - 8 试剂对光敏感，操作过程中应尽量避免强光照射，试剂要避光保存。
   • 当细胞中含有较多的还原剂（如谷胱甘肽）时，可能会对实验结果产生干扰，需要考虑这种因素并进行适当调整。
   • 在加入 CCK - 8 试剂后，孵育时间要严格按照试剂说明书和实验要求进行控制，过短可能导致甲臜生成不足，过长可能会因为细胞状态改变等因素影响结果准确性。