- ￥300
- ~50 nt，默认不含修饰碱基
- 南京
- 2025年12月19日
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- 详细信息
- 技术资料
- 提供商：
宜明生物
- 服务名称：
shRNA IVT synthesis and purification
一、服务概述
shRNA IVT synthesis and purification 服务专注于小发夹 RNA（short hairpin RNA, shRNA）的体外转录（IVT）合成与高纯度纯化，为 RNA 干扰（RNAi）领域的科研机构、生物医药企业提供从序列设计、专项制备到严格质控的一站式解决方案。shRNA 通过形成茎环结构，在细胞内可加工为 siRNA，进而介导靶基因沉默，是基因功能研究、疾病机制探索及药物靶点验证的核心工具。
本服务针对 shRNA 茎环结构易折叠、转录易产生截短产物的痛点，采用优化的 IVT 体系与定制化纯化工艺，高效合成高活性 shRNA，结合 zeta 电位检测、沉默效率验证等多维度质控，确保产品满足细胞转染、动物模型构建等实验需求，助力客户高效推进基因沉默相关研究。
二、核心优势
1. 茎环专属 IVT 体系，攻克结构折叠与转录效率难题
针对 shRNA 茎环结构（通常茎部 19-21bp、环部 4-9nt）易形成二级结构导致转录终止的痛点，研发 shRNA 专属 IVT 反应体系：采用高保真 T7 RNA 聚合酶（经突变优化，对茎环结构的通过能力提升 50%），搭配含茎环解旋辅助因子的缓冲液，有效抑制转录过程中的链终止现象，使 shRNA 完整产物比例≥90%，较传统 IVT 体系转录效率提升 40% 以上；添加 RNA 抗折叠试剂与 RNase 抑制剂，减少转录过程中 shRNA 因折叠导致的聚集与降解，确保产物活性保留率≥95%。针对特殊茎环结构（如长茎、复杂环序列），可通过序列预优化（如调整环部碱基组成、优化茎部 GC 含量至 40%-60%）与转录温度梯度调控，进一步提升合成效率与产物完整性。
2. 精准序列定制，适配多类基因沉默场景
基于专业生物信息学平台，提供高度个性化的 shRNA 序列设计与合成服务：
- 靶基因靶向设计：根据客户提供的靶基因序列，利用 siRNA/shRNA 设计算法（整合脱靶预测数据库），精准设计茎部靶向序列（19-21nt）与环部序列（如 TTTT、CTCGAG），确保 shRNA 对靶基因的沉默效率≥70%，同时降低脱靶风险（脱靶评分≤2 分，按行业标准评分体系）；
- 功能修饰定制：支持添加 5' 端磷酸化（促进细胞内加工为 siRNA）、3' 端 polyA 尾（提升稳定性）、荧光标记（FAM/Cy3，用于细胞内定位追踪）或生物素标记（用于 shRNA - 蛋白互作研究），满足多样化实验需求；
- 对照 shRNA 定制：提供阴性对照（非靶向序列，如 scramble shRNA）、阳性对照（靶向管家基因，如 GAPDH、β-actin shRNA），方便客户设置实验对照，确保结果可靠性。
3. 分级纯化工艺，保障 shRNA 高纯度与低杂质
针对 shRNA 分子小（通常 50-70nt）、易与短片段杂质共纯化的特性，采用 “磁珠预纯化 - 高效液相色谱（HPLC）- 超滤脱盐” 分级纯化策略：
- 磁珠预纯化：通过特异性核酸结合磁珠（针对小片段 RNA 优化结合条件），高效去除未反应核苷酸、单链短片段 RNA（＜30nt）及部分蛋白杂质；
- HPLC 纯化：采用反相色谱柱（针对小片段 RNA 的疏水性优化洗脱梯度），精准分离完整 shRNA 与截短产物、DNA 模板、聚合酶等杂质，确保主峰纯度≥98%；
- 超滤脱盐：使用 10kDa 截留分子量超滤膜，去除 HPLC 洗脱液中的盐类与小分子杂质，同时浓缩样品，避免 shRNA 因反复浓缩导致的降解。最终产品内毒素含量＜0.05 EU/μg，RNase 残留＜0.01 U/μg，满足原代细胞、干细胞等敏感细胞的转染需求。
4. 全流程质控，聚焦 shRNA 沉默功能有效性
建立针对 shRNA 的专项质控体系，覆盖 “合成 - 纯化 - 功能验证” 全流程：
- 结构完整性检测：采用高分辨率毛细管电泳（CE，检测分辨率 0.1nt）与 15% 变性聚Acrylamide凝胶电泳（PAGE），确保 shRNA 无明显降解（降解片段比例＜5%），分子量与理论值偏差＜1%；
- 浓度与纯度检测：通过 Qubit 荧光定量仪（选用小 RNA 高灵敏度试剂盒）与 Nanodrop 检测，确保 A260/A280 比值 1.8-2.1，A260/A230 比值≥2.0（无盐类与有机物污染）；
- 功能活性验证：通过细胞转染实验（选用 HEK293T 细胞或客户指定细胞系），采用 qPCR 检测靶基因 mRNA 沉默效率（确保≥70%），Western blot 验证靶蛋白表达抑制效果，提供完整的活性验证数据；
- 稳定性检测：通过 zeta 电位检测评估 shRNA 的胶体稳定性（电位绝对值≥12mV，避免储存中聚集），并提供 4℃、-20℃、-80℃储存条件下的稳定性数据（监测 1 个月内的完整性与活性变化）。每批次产品提供详尽质检报告，批次间性能差异＜5%，为实验结果的可重复性提供保障。
5. 灵活交付与增值服务，适配基因沉默科研节奏
配备 shRNA 专项生产与质控团队，标准订单 3-5 个工作日内完成交付（复杂结构 shRNA 需额外 1 个工作日），加急订单最快 2 个工作日出具产物；支持从 μg 级（科研小试，如细胞系沉默验证）到 mg 级（中试生产，如动物体内 RNAi 实验）的产量定制，可根据客户需求分批次交付（避免反复冻融影响 shRNA 活性）。针对高通量基因沉默筛选项目，提供批量 shRNA 合成服务，并可提供混样、分装（按实验需求分至 96 孔 / 384 孔板）及与转染试剂的预混合服务，大幅提升实验效率。
三、服务规格与交付内容
1. 服务规格
| 服务项目 | 服务详情 |
| 合成类型 | 靶向 shRNA、阴性对照 shRNA、阳性对照 shRNA、定制功能修饰 shRNA |
| 合成长度 | 50-100nt（常规茎环结构），支持＞100nt 复杂结构 shRNA 定制（需提前评估可行性） |
| 修饰选项 | 5' 端：磷酸化、荧光标记（FAM/Cy3/Cy5）、生物素；3' 端：polyA 尾、荧光标记、生物素；全链修饰：2'-O - 甲基化（提升稳定性） |
| 产量范围 | 1μg-50mg（可根据需求定制更大规模） |
| 适配场景 | 细胞水平 RNAi 实验、动物体内 RNAi 实验（如尾静脉注射、局部注射）、基因功能筛选、药物靶点验证 |
2. 检测项目（可选）
| 检测内容 | 周期 |
| Total Potein Residue | 一周 |
| Plasmid DNA Residue | 一周 |
| Endotoxin assay | 一周 |
| BioBurden | 两周 |
3. 交付内容
- 高纯度 shRNA 样本：无菌无酶低吸附离心管分装（避免小片段 RNA 吸附管壁，10-200μL / 管），干冰运输，-80℃储存可稳定保存 6 个月以上（建议分装后避免反复冻融）；
- 完整质检报告：根据客户需求可提供包含浓度 / 纯度数据、电泳图谱（CE 与 PAGE）、靶基因沉默效率验证报告（qPCR+Western blot 数据）、修饰效率检测（如适用）、内毒素与 RNase 残留检测报告；
- 使用指南：涵盖 shRNA 溶解方法（推荐使用无酶水，避免剧烈震荡）、转染条件优化建议（如转染试剂选择、shRNA 浓度梯度设置）、储存与稳定性说明、沉默效率检测方法参考；
- 原始数据文件：根据客户需求可提供包含电泳原始图谱、荧光定量数据、沉默验证实验原始数据（qPCR Ct 值、Western blot 灰度分析结果），方便客户追溯与发表需求。
四、应用场景
1. 基因功能基础研究
用于细胞系中靶基因的沉默，通过检测基因沉默后细胞生理功能变化（如增殖、凋亡、迁移能力），解析基因在细胞信号通路、代谢网络中的作用，助力基因功能注释与生命科学基础理论研究（如探索肿瘤相关基因在细胞癌变中的调控机制）。
2. 疾病模型构建
在动物模型（小鼠、大鼠、斑马鱼）中，通过 shRNA 介导的基因沉默，构建疾病相关模型（如沉默抑癌基因构建肿瘤模型、沉默神经退行性疾病相关基因构建病理模型），用于研究疾病发生发展机制，或评估候选药物对疾病模型的干预效果。
3. 药物靶点验证与筛选
在药物研发早期，通过 shRNA 沉默候选药物靶点基因，检测其对药物活性的影响（如沉默靶点后药物抑制肿瘤细胞增殖效果下降），验证靶点的有效性与必要性；针对药物作用通路中的多个基因，通过批量 shRNA 合成开展高通量筛选，快速定位关键调控基因，加速药物研发进程。
4. 细胞工程与工业生物技术
用于微生物（细菌、酵母）的基因沉默，通过抑制冗余代谢通路基因表达，提升目标产物（如工业酶、生物燃料、药用化合物）的合成效率；在干细胞诱导分化中，通过沉默分化抑制基因，促进干细胞向靶细胞类型（如心肌细胞、神经细胞）分化，助力细胞工程与再生医学研究。
五、服务流程与技术支持
1. 服务流程
- 需求沟通：客户提供靶基因序列、沉默效率要求、shRNA 修饰需求及产量要求，技术团队提供序列设计方案（含脱靶预测报告）、对照 shRNA 推荐及方案报价；
- 序列确认与合成：客户确认序列后，启动 shRNA 专属 IVT 合成，全程监控转录过程（通过实时电泳监测产物完整性）；
- 纯化与质控：完成合成后进行分级纯化，同步开展专项质控检测（含细胞水平沉默效率验证）；
- 交付与售后：质检合格后，产品与报告同步交付，提供后续实验技术支持。
2. 技术支持
- 专业咨询：提供 shRNA 序列设计（如茎环结构优化）、RNAi 实验方案设计（如转染方法选择、沉默效率检测时间点建议）、脱靶风险评估等专业咨询，协助解决 shRNA 沉默效率低、细胞毒性高等问题；
- 问题解决：针对 shRNA 降解、转染后无沉默效果等问题，提供 troubleshooting 方案（如调整储存条件、优化转染试剂比例、更换靶序列）；
- 定制化培训：为客户团队提供 shRNA 合成与应用相关培训，包括 IVT 原理、小 RNA 纯化技术、RNAi 实验操作（如 qPCR/Western blot 检测）等，提升客户自主实验能力。
shRNA IVT synthesis and purification 服务以 “茎环适配、高效沉默、稳定可靠” 为核心，通过专项技术优化与严格质控，为 RNA 干扰领域提供高质量 shRNA 产品与专业服务，助力科研人员与企业突破小发夹 RNA 合成技术瓶颈，加速基因沉默技术在基础研究与产业转化中的应用。
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IVT synthesized shRNA
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