- ￥25000
- lssD0001，线性
- 南京
- 2025年12月19日
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- 详细信息
- 技术资料
- 提供商：
宜明生物
- 服务名称：
非复制型lssDNA synthesis and purification
一、服务概述
非复制型 lssDNA（Non-replicative Linear Single-Stranded DNA，非复制型线性单链 DNA）synthesis and purification 服务，专注于不具备自主复制能力的线性单链 DNA 的定制合成与高纯度纯化，为分子生物学、体外诊断、基因编辑等领域的科研机构与生物医药企业，提供从序列设计、专项制备到严格质控的一站式解决方案。
非复制型 lssDNA 因去除复制起点（ori）、rep 基因等复制元件，仅保留核心功能序列（如杂交结合区、编辑模板区、信号标记区），具有结构简单、合成难度低、与靶分子结合灵活等优势，可作为 PCR 引物、基因编辑模板、核酸探针、体外筛选文库等工具，在体外扩增、分子诊断、精准基因编辑等场景中广泛应用。本服务针对非复制型 lssDNA 易降解、合成易产生截短产物、杂质去除难度大等技术痛点，采用高保真合成体系与定制化纯化工艺，高效合成高活性非复制型 lssDNA，结合多维度质控（如完整性检测、功能活性验证）确保产品满足体外实验、诊断试剂开发等严苛需求，助力客户突破线性单链 DNA 应用技术瓶颈。
二、核心优势
1. 功能序列精准设计，适配多元应用场景
针对非复制型 lssDNA 无需复制元件、聚焦核心功能的特性，建立专业序列设计平台：
- 功能导向优化：根据客户需求（如 PCR 扩增、基因编辑、探针杂交），精准保留核心功能序列（如引物的退火区、编辑模板的突变位点、探针的互补结合区），去除冗余序列，使序列长度按需控制（20-10000nt），降低合成成本与后续实验干扰；
- 复杂序列适配：针对高 GC 含量（＞75%）、重复序列（如多拷贝检测位点）、特殊结构（如引物二聚体预防序列）等复杂序列，通过碱基分布调整（如插入 GC 平衡碱基）、末端修饰（如添加茎环结构抑制二聚体）、分段合成拼接等策略，解决合成过程中序列折叠、合成终止等问题，确保功能序列完整性与有效性；
- 修饰兼容性设计：提前评估荧光标记、生物素标记、磷酸化、氨基化等修饰对功能的影响，优化修饰位点（如引物 5' 端磷酸化用于连接反应、探针 3' 端荧光标记用于信号检测），避免修饰干扰核心功能（如引物退火效率、探针杂交特异性），修饰效率可达 98% 以上。
2. 高保真合成体系，保障产物完整性与均一性
针对传统化学合成易产生截短产物、碱基错配的痛点，研发非复制型 lssDNA 专属高保真合成体系：
- 高保真合成酶与试剂：采用经过基因工程改造的高保真 DNA 合成酶（错配率＜1×10⁻⁶），搭配高纯度核苷酸底物（纯度≥99.9%），减少合成过程中的碱基插入错误与缺失，确保全长产物比例≥95%，较传统体系降低错配率 60% 以上；
- 合成过程实时监控：通过高效液相色谱（HPLC）实时监测每一步合成反应，及时调整反应条件（如延长偶联时间、增加活化剂浓度），避免因序列复杂导致的合成停滞，确保长链 lssDNA（如 5000nt）合成效率提升 40% 以上；
- 末端精准处理：根据需求对 lssDNA 末端进行平滑化、磷酸化、氨基化等精准处理，去除合成残留的保护基团与末端缺陷，确保末端反应活性（如连接反应效率≥90%、偶联反应效率≥85%）。
3. 分级纯化工艺，严控杂质与污染物
针对非复制型 lssDNA 易混杂短片段合成副产物、脱保护试剂残留、盐类杂质的特性，采用 “磁珠预纯化 - 高效液相色谱（HPLC）- 超滤脱盐” 三级纯化策略：
- 磁珠预纯化：使用针对线性单链 DNA 的特异性亲和磁珠（通过碱基互补或电荷作用靶向结合），高效去除短片段合成副产物（＜50nt，去除率≥99%）、未反应核苷酸（去除率≥99.5%），初步纯化纯度达 92% 以上；
- HPLC 精制：采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）或离子交换高效液相色谱（IE-HPLC），根据 lssDNA 的分子量与电荷特性优化洗脱梯度，精准分离全长 lssDNA 与截短产物、碱基错配产物，使最终纯度提升至 98% 以上；
- 超滤脱盐与浓缩：使用 3kDa-10kDa 截留分子量的超滤膜（根据 lssDNA 长度选择），去除纯化过程中残留的盐类、有机溶剂、脱保护试剂等杂质，同时将样品浓缩至客户需求浓度（0.1-20μg/μL），避免反复浓缩导致的 DNA 降解。最终产品内毒素含量＜0.05 EU/μg，核酸酶残留＜0.01 U/μg，满足体外诊断试剂、基因编辑实验等高标准需求。
4. 全流程质控，聚焦功能活性与稳定性
建立覆盖 “合成 - 纯化 - 功能验证” 全流程的专项质控体系，确保产品质量与功能：
- 结构完整性检测：采用毛细管电泳（CE）与变性聚Acrylamide凝胶电泳（PAGE）检测 lssDNA 分子量，确保与理论值偏差＜1%，无明显降解片段（降解比例＜3%）；通过纳米滴度仪（Nanodrop）与 Qubit 荧光定量仪双重检测浓度与纯度，确保 A260/A280 比值 1.8-2.1，A260/A230 比值≥2.0；
- 功能活性验证：根据应用场景提供针对性活性检测：如 PCR 引物应用场景，通过 PCR 扩增实验检测引物特异性（无非特异性条带）与扩增效率（Ct 值偏差＜0.5）；基因编辑模板应用场景，通过体外编辑实验检测模板引导效率（引导效率≥80%）；核酸探针应用场景，通过荧光杂交实验检测探针杂交特异性（无交叉杂交信号）与灵敏度（检测限低至 10 copies）；
- 稳定性检测：通过加速稳定性实验（37℃储存 7 天、4℃储存 3 个月）监测 lssDNA 的完整性与功能活性变化，确保 4℃储存 3 个月内全长产物比例下降＜5%、功能活性保留率≥90%；通过 zeta 电位检测评估胶体稳定性（电位绝对值≥15mV），避免储存与使用过程中聚集或吸附。每批次产品提供详尽质检报告，批次间性能差异＜3%，为实验结果的可重复性提供保障。
5. 灵活交付与增值服务，适配科研与产业需求
配备非复制型 lssDNA 专项生产与质控团队，标准订单 3-5 个工作日内完成交付（超长链 lssDNA＞5000nt 需额外 1-2 个工作日），加急订单最快 2 个工作日出具产物；支持从 μg 级（科研小试，如体外功能验证）到 kg 级（产业生产，如诊断试剂批量制备）的产量定制，可根据客户需求分批次交付（如按诊断试剂批次需求分装为 10μL / 支、50μL / 支），避免反复冻融影响 DNA 稳定性；针对体外诊断、基因编辑产业客户，提供定制化分装（无菌无酶管、避光管）、兼容性测试（如与 PCR 反应体系、编辑酶的配伍性）、规模化生产工艺优化（如连续合成流程设计）等增值服务，大幅提升研发与生产效率。
三、服务规格与交付内容
1. 服务规格
| 服务项目 | 详情 |
| 合成类型 | PCR 引物型 lssDNA、基因编辑模板型 lssDNA、核酸探针型 lssDNA、体外筛选文库型 lssDNA、连接反应型 lssDNA |
| 合成长度 | 20-10000nt（常规），支持＞10000nt 超长链非复制型 lssDNA 定制（需提前评估可行性） |
| 修饰选项 | 5' 端：磷酸化、荧光标记（FAM/Cy3/Cy5/ROX）、生物素、氨基化、巯基化；3' 端：荧光标记、生物素、氨基化、磷酸化；链内修饰：硫代磷酸酯（提升抗酶解能力）、锁核酸（LNA，增强杂交稳定性）、肽核酸（PNA，提升结合亲和力） |
| 产品范围 | 1μg-1000kg（可根据需求定制更大规模） |
| 适配场景 | PCR 扩增、qPCR 检测、基因编辑（引导编辑 / 碱基编辑）、核酸杂交诊断、SELEX 体外筛选、DNA 连接反应 |
2. 检测项目（可选）
| 检测内容 | 周期 |
| Endotoxin assay | 一周 |
| BioBurden | 两周 |
3. 交付内容
- 高纯度非复制型 lssDNA 样本：无菌无酶低吸附离心管 / 试剂瓶分装（10-1000μL / 管，产业订单可提供 10-500mL 试剂瓶包装），干冰运输，4℃储存可稳定保存 3 个月，-20℃储存可稳定保存 12 个月以上（建议分装后避免反复冻融）；
- 完整质检报告：根据客户需求可提供包含浓度 / 纯度数据（Nanodrop 与 Qubit 检测结果）、完整性检测图谱（CE 与 PAGE 电泳图）、功能活性验证报告（如 PCR 扩增曲线、编辑效率测序数据、杂交信号图）、修饰效率检测（如 HPLC 修饰比例分析）、内毒素与核酸酶残留检测报告；
- 使用指南：涵盖非复制型 lssDNA 溶解方法（推荐使用无酶 TE 缓冲液或超纯水，温和混匀）、体外实验操作建议（如 PCR 引物退火温度、探针杂交条件、编辑模板用量）、储存与稳定性说明、常见问题解决方案（如降解应对、活性恢复方法）；
- 原始数据文件：根据客户需求可提供包含电泳原始图谱、功能活性验证原始数据（如 qPCR 原始 Ct 值、测序峰图、杂交荧光强度数据），方便客户追溯与成果发表 / 试剂注册。
四、应用场景
1. 体外诊断与分子检测
作为 PCR/qPCR 引物或核酸探针，非复制型 lssDNA 凭借高特异性与高灵敏度，广泛应用于病原体检测与疾病诊断。例如，在新冠病毒核酸检测中，非复制型 lssDNA 作为特异性引物与探针，可精准识别病毒 ORF1ab、N 基因等靶点，检测限低至 1 copy/mL，且无交叉反应；在肿瘤液态活检中，作为 ctDNA 突变位点检测探针，通过荧光杂交实现循环肿瘤 DNA 的高灵敏度捕获，助力肿瘤早期诊断与预后监测。
2. 基因编辑辅助研究
作为引导编辑（Prime Editing）、碱基编辑（Base Editing）的体外模板，非复制型 lssDNA 可提供精准的编辑序列（如单碱基替换、小片段插入 / 缺失模板），因线性结构易与 Cas 蛋白结合，编辑效率较环状 DNA 模板提升 30%-50%；同时无复制能力，避免模板在细胞内持续存在导致的脱靶风险。例如，在遗传病相关基因突变修复研究中，非复制型 lssDNA 作为引导编辑模板，可精准修复镰状细胞贫血的致病点突变，修复效率达 75% 以上，且无随机整合。
3. 体外扩增与分子克隆
作为 PCR 引物或连接反应片段，非复制型 lssDNA 在基因扩增与克隆中发挥核心作用。例如，在基因克隆实验中，非复制型 lssDNA 作为 PCR 引物扩增目的基因，同时通过 5' 端磷酸化修饰实现与载体的高效连接，连接效率较未修饰引物提升 60%；在文库构建中，作为接头序列连接至基因组 DNA 片段两端，用于高通量测序（如全外显子测序、ChIP-seq），确保文库构建的均一性与完整性。
4. 体外筛选与分子互作研究
作为 SELEX（指数富集的配体系统进化）筛选的文库或分子互作探针，非复制型 lssDNA 可用于核酸适配体筛选与蛋白 - DNA 互作研究。例如，在肿瘤标志物适配体筛选中，非复制型 lssDNA 文库通过多轮筛选与扩增，可获得高特异性结合肿瘤表面蛋白的适配体，结合亲和力 KD 值≤10⁻⁹ M；在转录因子功能研究中，作为生物素标记的探针，通过 DNA pull-down 实验捕获与特定启动子结合的转录因子，结合质谱分析鉴定互作蛋白，助力解析基因调控网络。
五、服务流程与技术支持
1. 服务流程
- 需求沟通：客户提供非复制型 lssDNA 的功能需求（如 PCR 扩增、基因编辑、探针杂交）、序列信息（或核心功能区域需求）、修饰与产量要求，技术团队提供序列设计方案（含引物二聚体预测、探针特异性分析）、可行性评估报告及方案报价；
- 序列确认与合成：客户确认序列后，启动非复制型 lssDNA 合成，同步优化合成条件（如针对长链序列调整偶联时间、针对高 GC 序列添加助溶试剂）；
- 纯化与质控：完成合成后进行三级纯化，开展全流程质控检测（含功能活性验证）；
- 交付与售后：质检合格后，产品与报告同步交付，提供后续实验技术支持。
2. 技术支持
- 专业咨询：提供非复制型 lssDNA 序列设计（如引物退火温度计算、探针杂交区域选择）、实验方案设计（如 PCR 反应体系优化、基因编辑模板用量确定）、数据分析建议（如 qPCR 熔解曲线分析、编辑效率测序数据分析），协助解决合成效率低、功能活性不达预期等问题；
- 问题解决：针对产品降解、体外实验效果差（如 PCR 非特异性扩增、探针杂交信号弱）等问题，提供 troubleshooting 方案（如调整储存条件、优化修饰类型、更换序列片段）；
- 定制化培训：为客户团队提供非复制型 lssDNA 合成与应用相关培训，包括合成技术原理、纯化工艺、体外功能验证实验（如 qPCR 操作、基因编辑效率检测）等，提升客户自主实验能力。
非复制型 lssDNA synthesis and purification 服务以 “高保真、高活性、高适配性” 为核心，通过专项技术优化与严格质控，为线性单链 DNA 应用领域提供高质量产品与专业服务，助力科研人员与企业突破非复制型 lssDNA 合成及应用技术瓶颈，加速体外诊断、基因编辑与分子生物学研究的创新发展。
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