- ￥10000
- rcssD0001，环状
- 南京
- 2025年12月19日
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- 详细信息
- 技术资料
- 提供商：
宜明生物
- 服务名称：
复制型cssDNA synthesis and purification
一、服务概述
复制型 cssDNA（Replicative Closed Circular Single-Stranded DNA，复制型闭合环状单链 DNA）synthesis and purification 服务，专注于具备自主复制能力的闭合环状单链 DNA 的定制合成与高纯度纯化，为分子生物学、病毒学、基因治疗等领域的科研机构与生物医药企业，提供从序列设计、专项制备到严格质控的一站式解决方案。复
制型 cssDNA 凭借独特的环状单链结构与自主复制特性，可作为病毒载体骨架（如腺相关病毒 AAV、慢病毒）、滚环复制模板及体外进化筛选工具，在基因递送、疫苗研发、分子诊断等场景中具有不可替代的作用。本服务针对复制型 cssDNA 环化效率低、易形成线性或开环杂质、复制元件功能易受影响等技术痛点，采用定制化环化体系与多步纯化工艺，高效合成高活性复制型 cssDNA，结合多维度质控（如复制活性验证、环化率检测）确保产品满足细胞转染、病毒包装等严苛实验需求，助力客户突破环状单链 DNA 应用技术瓶颈。
二、核心优势
1. 复制元件专属设计，保障自主复制能力
针对复制型 cssDNA 需包含复制起点（如 ori、rep 基因）、包装信号等关键元件的特性，建立专业序列设计平台：
- 元件优化整合：根据客户需求（如病毒载体类型、宿主细胞选择），精准整合功能性复制元件（如 AAV 的 ITR 序列、M13 噬菌体的 ori 区域），通过生物信息学算法优化元件排列顺序与间隔距离，避免元件间干扰，确保复制效率提升 40% 以上；
- 序列兼容性验证：提前通过体外复制实验验证设计序列的复制能力，针对高 GC 含量（＞65%）、重复序列（如病毒包装信号）等复杂区域，采用碱基替换、间隔序列插入等策略，解决复制过程中模板停滞、突变率高等问题；
- 定制化复制体系：适配原核（如大肠杆菌）、真核（如 HEK293T 细胞）等不同宿主的复制需求，提供包含特异性复制酶、辅助因子的配套反应体系，确保复制型 cssDNA 在目标宿主中高效自主复制。
2. 高效环化技术，提升闭合环状比例
针对传统环化方法（如 DNA 连接酶连接）效率低、开环产物多的痛点，研发复制型 cssDNA 专属环化体系：
- 酶促环化优化：采用高保真单链 DNA 连接酶（经突变改造，环化效率提升 80%），搭配环化促进缓冲液（含单链退火辅助因子），使闭合环状产物比例≥90%，较传统方法降低开环杂质 50% 以上；
- 模板预处理工艺：对线性单链 DNA 模板进行末端修饰（如磷酸化、氨基化）与纯度纯化，去除末端缺口、碱基错配等缺陷，减少环化过程中的异常连接；
- 环化效率实时监测：通过琼脂糖凝胶电泳（搭配单链 DNA 染色剂）与高效液相色谱（HPLC）实时监测环化进程，确保环化率达标后再进入后续纯化步骤，避免无效产物积累。
3. 分级纯化工艺，严控杂质与污染物
针对复制型 cssDNA 易混杂线性 DNA、开环 DNA、宿主核酸酶等杂质的特性，采用 “磁珠捕获 - 密度梯度离心 - 超滤脱盐” 三级纯化策略：
- 磁珠特异性捕获：使用针对闭合环状单链 DNA 的特异性亲和磁珠（通过识别环化结构实现靶向结合），高效去除线性单链 DNA、双链 DNA 杂质，初步纯化纯度达 90% 以上；
- 密度梯度离心精制：采用氯化铯 - 溴化乙锭密度梯度离心技术，利用闭合环状、开环、线性 DNA 的密度差异，实现精准分离，使闭合环状产物纯度提升至 98% 以上；
- 超滤脱盐与浓缩：使用 30kDa 截留分子量的超滤膜，去除离心过程中残留的盐类、染色剂及小分子杂质，同时将样品浓缩至客户需求浓度（1-10μg/μL），避免反复浓缩导致的 DNA 断裂。最终产品内毒素含量＜0.05 EU/μg，核酸酶残留＜0.01 U/μg，满足病毒包装、动物体内基因递送等高标准需求。
4. 全流程质控，聚焦复制与功能活性
建立覆盖 “合成 - 环化 - 复制” 全流程的专项质控体系，确保产品质量与功能：
- 结构完整性检测：通过原子力显微镜（AFM）观察 DNA 形态，验证闭合环状结构；采用毛细管电泳（CE）检测分子量，确保与理论值偏差＜2%，无明显降解片段（降解比例＜5%）；
- 复制活性验证：通过体外复制实验（如加入复制酶与底物 dNTP），检测复制型 cssDNA 的复制效率（以复制产物量定量，确保≥10 倍复制扩增）；在目标宿主细胞（如大肠杆菌、HEK293T）中验证自主复制能力，提供复制周期、拷贝数等关键数据；
- 纯度与稳定性检测：通过 Nanodrop 与 Qubit 荧光定量仪检测浓度与纯度（A260/A280 比值 1.8-2.1，A260/A230 比值≥2.0）；通过 zeta 电位检测评估胶体稳定性（电位绝对值≥15mV，避免储存中聚集），并提供 4℃、-20℃、-80℃储存条件下的稳定性数据（监测 3 个月内的环化率与复制活性变化）。每批次产品提供详尽质检报告，批次间性能差异＜5%，为实验结果的可重复性提供保障。
5. 灵活交付与增值服务，适配多元应用场景
配备复制型 cssDNA 专项生产与质控团队，标准订单 10-14 个工作日内完成交付（含复制活性验证，复杂结构需额外 2-3 个工作日），加急订单最快 7 个工作日出具产物；支持从 μg 级（科研小试，如复制效率验证）到 mg 级（中试生产，如病毒包装）的产量定制，可根据客户需求分批次交付（避免反复冻融影响 DNA 稳定性）。针对病毒载体研发、体外进化筛选等项目，提供批量合成服务，并可提供复制体系配套试剂（如专用复制酶、宿主细胞培养基）、病毒包装优化建议等增值服务，大幅提升实验效率。
三、服务规格与交付内容
1. 服务规格
| 服务项目 | 详情 |
| 合成类型 | 病毒载体骨架型 cssDNA（如 AAV-ITR-cssDNA）、滚环复制模板型 cssDNA、体外筛选型 cssDNA |
| 合成长度 | 500-10000nt（常规），支持＞10000nt 超长链复制型 cssDNA 定制（需提前评估可行性） |
| 修饰选项 | 5' 端：磷酸化、荧光标记（FAM/Cy3/Cy5）、生物素；3' 端：氨基化、荧光标记、生物素；链内修饰：硫代磷酸酯（提升抗酶解能力） |
| 产品范围 | 1μg-100mg（可根据需求定制更大规模） |
| 适配场景 | 病毒包装（AAV、慢病毒）、体外 DNA 复制研究、SELEX 体外筛选、基因递送载体构建 |
2. 检测项目（可选）
| 检测内容 | 周期 |
| Endotoxin assay | 一周 |
| BioBurden | 两周 |
- 高纯度复制型 cssDNA 样本：无菌无酶低吸附离心管分装（避免环状 DNA 吸附管壁，50-500μL / 管），干冰运输，-80℃储存可稳定保存 18 个月以上（建议分装后避免反复冻融）；
- 完整质检报告：根据客户需求可提供包含浓度 / 纯度数据、环化率检测结果（HPLC 图谱）、复制活性验证报告（体外复制产物定量、宿主细胞复制拷贝数）、修饰效率检测（如适用）、内毒素与核酸酶残留检测报告；
- 使用指南：涵盖复制型 cssDNA 溶解方法（推荐使用无酶 TE 缓冲液，温和混匀）、复制体系配置建议（如复制酶浓度、反应温度）、病毒包装操作要点（如与辅助质粒共转染比例）、储存与稳定性说明；
- 原始数据文件：根据客户需求可提供包含电泳原始图谱、AFM 成像图、复制活性验证原始数据（如 qPCR 定量结果、病毒滴度检测数据），方便客户追溯与发表需求。
四、应用场景
1. 病毒载体研发与包装
作为 AAV、慢病毒等病毒载体的骨架 DNA，复制型 cssDNA 可在宿主细胞中自主复制并高效包装成病毒颗粒。例如，含 AAV ITR 序列的复制型 cssDNA，与辅助质粒共转染 HEK293T 细胞后，可大量复制并包装成重组 AAV 病毒，用于体内外基因递送（如神经系统疾病的基因治疗研究），较传统双链 DNA 载体提升病毒滴度 3-5 倍。
2. 体外 DNA 复制机制研究
用于探索原核 / 真核生物的 DNA 复制机制，通过合成含突变复制元件的复制型 cssDNA，研究复制起点、复制酶对复制效率的影响；结合高通量测序技术，分析复制过程中的突变热点与纠错机制，助力分子生物学基础理论研究（如探索 DNA 复制与肿瘤发生的关联）。
3. 体外进化与分子筛选
作为 SELEX（指数富集的配体系统进化）技术的筛选模板，复制型 cssDNA 可通过自主复制实现快速扩增，无需反复 PCR 扩增（减少 PCR 引入的突变），高效筛选靶向蛋白、小分子化合物的核酸适配体，用于疾病诊断（如肿瘤标志物检测）、药物研发（如核酸适配体药物）。
4. 基因治疗与疫苗研发
在基因治疗领域，复制型 cssDNA 可作为非病毒基因递送载体，凭借自主复制特性在靶细胞中持续表达治疗性蛋白（如凝血因子、抗体），用于单基因遗传病（如血友病）的治疗；在疫苗研发中，可作为 DNA 疫苗骨架，携带抗原基因并在体内自主复制，增强免疫应答强度与持续时间，提升疫苗保护效果。
五、服务流程与技术支持
1. 服务流程
- 需求沟通：客户提供复制型 cssDNA 的功能需求（如病毒载体类型、复制宿主、应用场景）、序列信息（或关键元件需求）、修饰与产量要求，技术团队提供序列设计方案（含复制元件整合建议）、复制活性预验证报告及方案报价；
- 序列确认与合成：客户确认序列后，启动线性单链 DNA 模板合成，同步优化环化与复制体系；
- 环化、纯化与质控：完成模板环化后进行分级纯化，开展全流程质控检测（含复制活性验证）；
- 交付与售后：质检合格后，产品与报告同步交付，提供后续实验技术支持。
2. 技术支持
- 专业咨询：提供复制型 cssDNA 序列设计（如复制元件选择、宿主适配性分析）、实验方案设计（如病毒包装条件优化、体外复制体系配置）、数据分析建议（如复制效率定量方法、病毒滴度检测），协助解决环化率低、复制效率不达预期等问题；
- 问题解决：针对产品降解、复制活性异常等问题，提供 troubleshooting 方案（如调整储存条件、优化复制体系成分、更换复制元件）；
- 定制化培训：为客户团队提供复制型 cssDNA 合成与应用相关培训，包括环化技术原理、纯化工艺、复制活性验证实验（如 qPCR 定量、病毒包装操作）等，提升客户自主实验能力。
复制型 cssDNA synthesis and purification 服务以 “复制高效、环化精准、稳定可靠” 为核心，通过专项技术优化与严格质控，为环状单链 DNA 应用领域提供高质量产品与专业服务，助力科研人员与企业突破复制型 cssDNA 合成及应用技术瓶颈，加速基因工程、病毒学与基因治疗领域的创新发展。
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