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- 2026年01月06日
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三技术重复：每个样本设置3复孔，确保数据可靠性； 严格质控：包括熔解曲线分析（确认单峰）、内参基因校正（GAPDH/β-actin等）、阴性对照； 交付数据：原始Ct值、ΔΔCt分析报告、表达量柱状图。 针对长链非编码RNA复杂二级结构优化引物设计； 支持多亚型检测及功能研究关联分析。
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文献和实验分析.4、几个概念：（1）扩增曲线 ：（2） 荧光阈值：（3）Ct值：CT值的重现性：5、定量原理：理想的PCR反应： X=X0*2n非理想的PCR反应： X=X0 (1+Ex)nn：扩增反应的循环次数X：第n次循环后的产物量X0：初始模板量Ex：扩增效率5、标准曲线6、绝对定量1）确定未知样品的 C(t)值2）通过标准曲线由未知样品的C(t)值推算出其初始量二、实时荧光定量PCR的几种方法介绍 方法一：SYBR Green法 （一）工作原理 1、SYBR Green 能结合到双链DNA的小沟
总的说来，荧光检测技术可大致分为两大类：通用型的荧光染料检测法和高特异性的荧光探针法。 前者主要是利用荧光染料(如SYBR Green I)与双链DNA分子结合发光的特性来指示扩增产物的增加，优点是：无需另外设计荧光探针 ，无需特别优化条件，简便易行，成本较低，能适用于任何一款定量 PCR 仪，缺点是专一性不如探针法； 而后者则利用荧光标记的特异性探针或者引物来识别模版，优点是特异性更高，适用于扩增序列专一检测(见下表)，不过增加了荧光探针的成本。
PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡，校正加样误差或者是孔与孔之间的误差，提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系，也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲，real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样，要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法，最好在PCR扩增程序结束
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