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武汉瀚海新酶生物科技有限公司
在 mRNA 的制备过程中,T7 RNA 聚合酶以 DNA 为模板进行转录,同时会形成不同长度的 dsRNA(Double-Stranded RNA) 副产物。外源 dsRNA 可被细胞中的 Toll 样受体 (TLR)、维甲酸诱导基因-I(RIG-I) 和黑色素瘤分化相关蛋白 5(MDA5) 识别而激活信号通路,释放 TNF-α 和 IFN-y 等细胞因子,导致炎症反应的发生。dsRNA 一方面让自身免疫系统与翻译系统间的反馈调节从而降低 mRNA 的翻译效率,另一方面 dsRNA 使机体形成记忆免疫,造成药物效力降低。
为监测和控制疫苗中主要杂质的残留量,需要在 mRNA 的生产过程中严格控制 dsRNA 的含量。
精准 dsRNA标准品定量
根据国家《标准物质管理办法》,对于一级标准物质,应使用绝对测量法或两种以上不同原理的准确可靠的方法定值。在只有一种定值方法的情况下,应使用多个实验室以同种准确可靠的方法定值。
瀚海新酶 dsRNA 标准品使用紫外分光光度法和 ddPCR 法两种方法对 dsRNA 标准品进行定量。

筛选出与 dsRNA 强亲和力和特异性的抗体对,并实现自制生产。抗体对只特异性识别 dsRNA, 对 ssRNA、ssDNA 以及 dsDNA 不具有识别性。
因抗体对对不同 UTP 修饰类型的 dsRNA,识别性存在差异,故试剂盒搭配 4 种不同修饰类型 dsRNA 标准品,保证测值的特异性。

dsRNA 的形成主要基于随机短片段与原 RNA 分子反向互补形成双链和 3' 末端继续延伸 RNA 后与原 RNA 分子反向互补配对形成发卡结构,目前无法准确分析 dsRNA 的长度分布情况。
瀚海新酶试剂盒对短中长片段的 dsRNA 识别差别性较小,对dsRNA 识别的通识性更能反应样本中 dsRNA 含量的真实水平,保证测值的准确性。


针对不同长度不同序列和不同长度混合的标准品,抗体对对dsRNA识别一致。

ELISA法依赖于抗体对dsRNA的特异性识别作用,mRNA二级结构不会改变抗体对对dsRNA的识别。

严格的生产管理和质控体系,试剂盒37℃热加速7天稳定、批间差CV<10%。

mRNA药物及质粒等生物制品的生产过程中,会存在DNase/RNase的残留和污染的可能性,包括生物样品中含有的内源性DNase/RNase,存在于环境、缓冲液、耗材表面、原料等外源性DNase/RNase。残留DNase/RNase如果跟随生物制品进入人体内,有可能引发高强度的免疫原性等反应,引起较严重的安全性风险。因此需要对生物制品的外来物料、耗材和环境等的DNase/RNase残留进行准确分析检测,使之控制在安全范围内。
高灵敏度 灵敏度是进口品牌的8倍
判断标准为:检测信号与空白信号比值>2为有污染,进口品牌的DNase检出限1x10-5U/μL,而瀚海新酶的DNase检出限1.25x10-6U/μL。进口品牌的RNase检出限2.5pg/mL,瀚海新酶的RNase检出限0.3125pg/mL。

试剂盒经过特殊的序列设计,探针可以识别多种酶类,满足多种场景多种样本的检测需求。

测试实验中常用的缓冲液或物料,对试剂盒不存在干扰。

产品信息

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文献和实验双链短RNA(dsRNA)阻断基因表达机理及双链RNA的构建
靶基因的表达。RNAi还具有很高的特异性。19个核苷酸的 dsRNA几乎可以完全抑制基因的表达,而将其中的一个核苷酸突变掉后,它对基因的抑制作用就消失了[9],这对dsRNA的应用是非常重要的,这可以避免dsRNA降解与靶mRNA同家族的其他的mRNA。 三. 双链RNA的构建 双链RNA可先在体外构建好,然后转染细胞。在体外构建双链RNA时,分别在体外转录出正义和反义 RNA,再将两者退火,形成双链RNA。体外合成的双链RNA可以用脂质体转入细胞中。但有些细胞脂质体转移效果
相关专题 1、Dicer酶 在RNA干扰研究中会用到Dicer酶,Dicer酶是RNaseIII型家族中的蛋白酶,可特异识别dsRNA,它可以切割以各种方式进入到细胞内的dsRNA,将其切割成19-21bp大小的短RNAs。 Dicer是来自果蝇RNA干扰必须的RNaseIII型蛋白。Dicer酶是RNase III家族中特异识别双链RNA的一员,它能以一种ATP依赖的方式逐步切割由外源导入或者由转基因
% ),这使得化学合成siRNA 的成本升高。体外转录制备长片断RNA 并不难,但是由于研究表明长片断的双链RNA (>29bps )在哺乳动物细胞中通常会引发抗病毒反应一种非特异基因表达抑制,而目前体外转录往往无法制备小于29bp 的小分子siRNA s 。一个新的研究发现,用RNase III 降解长片断双链RNA 成为siRNA s 库也能够有效诱导特异的基因沉默,这样可以避免了筛选有效siRNA s 的漫长过程,从而快速,经济的实现特定基因表达的沉默。在线虫、果蝇和其他一些物种的RNA 干扰(RNA
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