- ￥600
- 烜雅生物
- XY-ZL0003
- 国产
- 2025年12月18日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
188
- 英文名：
Stbl3 Chemically Competent Cell
- 保质期：
2年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
冻存管
英文名称：Stbl3 Chemically Competent Cell
形式：冻存管
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，琼脂：15.0，pH：7.0±0.1（25℃）
生长条件：37℃；18-24h；好氧 存储条件 -80℃
安全等级：1
操作步骤：
1.Stbl3感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中），加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入0.9 mL 室温S.O.C. 培养基或LB培养基（推荐使用SOC培养基，可提高转化效率）。
4.30℃，225 rpm复苏90分钟。（当质粒中含有不稳定片段时， 30℃培养可降低错误重组的概率，若转化controlPUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟。）
5.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 培养基上。
6.将平板倒置放于30℃培养箱过夜培养。（若转化controlPUC19 计算转化效率，则需37℃培养过夜）
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文献和实验短片段（5kb 以内）的序列克隆成功率。对于提高大片段克隆的成功率，可以从以下几方面考虑： ①选择合适的克隆载体，例如 pCC1-Brick 等适合装载大片段的载体； ②选择合适的克隆方法，通常无缝克隆技术如 Gibson 组装或者 Golden Gate 克隆对于大片段的组装效率更高； ③选择合适的纯化方式，纯化目的基因片段和线性化载体片段后再使用，并且注意两者的使用比例； ④选择合适的大肠杆菌感受态细胞，例如 stbl3，JM109 等； ⑤挑选单克隆菌落时需要注意，成功重组大片段的阳性单克
系列）：高拷贝会导致大片段质粒复制压力大，易丢失或断裂，优先用低拷贝载体（如 pACYC184，拷贝数 10-15）或大片段专用载体（如 BAC 载体 pBeloBAC11，可容纳 100kb 以上片段，在大肠杆菌中稳定存在）； ④选择合适的连接方法，比如 Gibson 组装（无缝克隆）的方法更适合 10-20kb 大片段的连接，相比传统的 T4 连接的方法，成功率更高，操作更简便； ⑤选择重组缺陷型感受态，提高大质粒的转化效率，如 Stbl3、DH10B 等，此外转化方式也会影响转化
法、 CaCl2、 RuCl等化学试剂法感受态细胞：处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源 DNA 分子通过时细胞的状态。转化细胞(转化子)：带有异源 DNA 分子的受体细胞( Transformant )。本实验以 E.coli DH5α 菌株为受体细胞，用 CaCl2 处理受体菌使其处于为感受态，然后与 pUC18质粒共保温，实现转化。 pUC18质粒携带有抗氨苄青霉素的基因，因而使接受了该质粒的受体菌具有抗氨苄青霉的特性，用 Apr符号表示。将经过转化后的全部受体细胞经过适应稀释，在含氨
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