pSET152①链霉菌表达质粒

基本信息
名称：pSET152①链霉菌表达质粒
别称: pSET-152

启动子:	无，需要自行克隆进去
原核抗性:	Apr
筛选标记:	Apr
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	30度
表达宿主:	链霉菌，放线菌等

质粒属性

载体宿主：	丝状真菌
载体用途：	蛋白表达
基因种属：
基因类型：	ORF
原核抗性：	Apr
筛选标记：
荧光蛋白：

质粒简介
     pSET152是一个链霉菌整合表达质粒， pSET'152载体能够将外源基因整合进入链霉菌基因组中，是链霉菌基因组高表达特定基因时常用的基因导入载体。
质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                5715 bp ds-DNA     circular SYN 27-JAN-2018
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5715
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     CDS             complement(163..507)
                     /codon_start=1
                     /gene="lacZ fragment"
                     /product="LacZ-alpha fragment of beta-galactosidase"
                     /label=lacZ-alpha
                     /translation="MITNSISRAAADPLESTCSPSLALAVVLQRRDWENPGVTQLNRLA
                     AHPPFASWRNSEEARTDRPSQQLRSLNGEWRLMRYFLLTHLCGISHRINSPMSSTSGIG
                     SAADAKCRST"
     rep_origin      complement(910..1498)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             1702..2502
                     /codon_start=1
                     /gene="aac(3)IV"
                     /product="aminoglycoside 3-N-acetyltransferase type IV     
                               "
                     /label=Apr
                     /note="confers resistance to apramycin (Paget and Davies, 
                     1996)"
                     /translation="MSSAVECNVVQYEWRKAELIGQLLNLGVTPGGVLLVHSSFRSVRP
                     LEDGPLGLIEALRAALGPGGTLVMPSWSGLDDEPFDPATSPVTPDLGVVSDTFWRLPNV
                     KRSAHPFAFAAAGPQAEQIISDPLPLPPHSPASPVARVHELDGQVLLLGVGHDANTTLH
                     LAELMAKVPYGVPRHCTILQDGKLVRVDYLENDHCCERFALADRWLKEKSLQKEGPVGH
                     AFARLIRSRDIVATALGQLGRDPLIFLHPPEAGCEECDAARQSIG"
     CDS             complement(2936..3307)
                     /codon_start=1
                     /gene="traJ"
                     /product="oriT-recognizing protein"
                     /label=traJ
                     /translation="MADETKPTRKGSPPIKVYCLPDERRAIEEKAAAAGMSLSAYLLAV
                     GQGYKITGVVDYEHVRELARINGDLGRLGGLLKLWLTDDPRTARFGDATILALLAKIEE
                     KQDELGKVMMGVVRPRAEP"
     oriT            3340..3449
                     /note="incP origin of transfer"
     protein_bind    3769..3868
                     /label=phage phi-C31 attP
                     /bound_moiety="phage phi-C31 integrase"
                     /note="attachment site of phage phi-C31"
     CDS             3878..5695
                     /codon_start=1
                     /product="integrase from phage phi-C31"
                     /label=phage phi-C31 integrase
                     /translation="MDTYAGAYDRQSRERENSSAASPATQRSANEDKAADLQREVERDG
                     GRFRFVGHFSEAPGTSAFGTAERPEFERILNECRAGRLNMIIVYDVSRFSRLKVM-DAIP
                     IVSELLALGVTIVSTQEGVFRQGNVMDLIHLIMRLDASHKESSLKSAKILDTKNLQREL
                     GGYVGGKAPYGFELVSETKEITRNGRMVNVVINKLAHSTTPLTGPFEFEPDVIRWWWRE
                     IKTHKHLPFKPGSQAAIHPGSITGLCKRMDADAVPTRGETIGKKTASSAWDPATVMRIL
                     RDPRIAGFAAEVIYKKKPDGTPTTKIEGYRIQRDPITLRPVELDCGPIIEPAEWYELQA
                     WLDGRGRGKGLSRGQAILSAMDKLYCECGAVMTSKRGEESIKDSYRCRRRKVVDPSAPG
                     QHEGTCNVSMAALDKFVAERIFNKIRHAEGDEETLALLWEAARRFGKLTEAPEKSGERA
                     NLVAERADALNALEELYEDRAAGAYDGPVGRKHFRKQQAALTLRQQGAEERLAELEAAE
                     APKLPLDQWFPEDADADPTGPKSWWGRASVDDKRVFVGLFVDKIVVTKSTTGRGQGTPI
                     EKRASITWAKPPTDDDEDDAQDGTEDVAA"
ORIGIN
        1 atctacgtct gtcgagaagt ttctgatcga aaagttcgac agcgtctccg acctgatgca
       61 gctctcgcag ggcgaagaat ctcgtgcttt cagcttcgat gtaggagggc gtggatatgt
      121 cctgcgggta aatagctgcg ccgatggttt ctacaaagat cgttatgttg atcggcactt
      181 tgcatcggcc gcgctcccga ttccggaagt gcttgacatt ggggaattta tgcggtgtga
      241 aataccgcac agatgcgtaa ggagaaaata ccgcatcagg cgccattcgc cattcaggct
      301 gcgcaactgt tgggaagggc gatcggtgcg ggcctcttcg ctattacgcc agctggcgaa
      361 agggggatgt gctgcaaggc gattaagttg ggtaacgcca gggttttccc agtcacgacg
      421 ttgtaaaacg acggccagtg ccaagcttgg gctgcaggtc gactctagag gatccgcggc
      481 cgcgcgcgat atcgaattcg taatcatgtc atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc
      541 gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta
      601 atgagtgagc taactcacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa
      661 cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat
      721 tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg
      781 agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc
      841 aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt
      901 gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag
      961 tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc
     1021 cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc
     1081 ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt
     1141 cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt
     1201 atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc
     1261 agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa
     1321 gtggtggcct aactacggct acactagaag aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa
     1381 gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg
     1441 tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga
     1501 agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg
     1561 gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttgg ttcatgtgca
     1621 gctccatcag caaaagggga tgataagttt atcaccaccg actatttgca acagtgccgt
     1681 tgatcgtgct atgatcgact gatgtcatca gcggtggagt gcaatgtcgt gcaatacgaa
     1741 tggcgaaaag ccgagctcat cggtcagctt ctcaaccttg gggttacccc cggcggtgtg
     1801 ctgctggtcc acagctcctt ccgtagcgtc cggcccctcg aagatgggcc acttggactg
     1861 atcgaggccc tgcgtgctgc gctgggtccg ggagggacgc tcgtcatgcc ctcgtggtca
     1921 ggtctggacg acgagccgtt cgatcctgcc acgtcgcccg ttacaccgga ccttggagtt
     1981 gtctctgaca cattctggcg cctgccaaat gtaaagcgca gcgcccatcc atttgccttt
     2041 gcggcagcgg ggccacaggc agagcagatc atctctgatc cattgcccct gccacctcac
     2101 tcgcctgcaa gcccggtcgc ccgtgtccat gaactcgatg ggcaggtact tctcctcggc
     2161 gtgggacacg atgccaacac gacgctgcat cttgccgagt tgatggcaaa ggttccctat
     2221 ggggtgccga gacactgcac cattcttcag gatggcaagt tggtacgcgt cgattatctc
     2281 gagaatgacc actgctgtga gcgctttgcc ttggcggaca ggtggctcaa ggagaagagc
     2341 cttcagaagg aaggtccagt cggtcatgcc tttgctcggt tgatccgctc ccgcgacatt
     2401 gtggcgacag ccctgggtca actgggccga gatccgttga tcttcctgca tccgccagag
     2461 gcgggatgcg aagaatgcga tgccgctcgc cagtcgattg gctgagctca tgagcggaga
     2521 acgagatgac gttggagggg caaggtcgcg ctgattgctg gggcaacacg tggagcggat
     2581 cggggattgt ctttcttcag ctcgctgatg atatgctgac gctcaatgcc gtttggcctc
     2641 cgactaacga aaatcccgca tttggacggc tgatccgatt ggcacggcgg acggcgaatg
     2701 gcggagcaga cgctcgtccg ggggcaatga gatatgaaaa agcctgaact caccgcgacg
     2761 tatcgggccc tggccagcta gctagagtcg acctgcaggt ccccggggat cggtcttgcc
     2821 ttgctcgtcg gtgatgtact tcaccagctc cgcgaagtcg ctcttcttga tggagcgcat
     2881 ggggacgtgc ttggcaatca cgcgcacccc ccggccgttt tagcggctaa aaaagtcatg
     2941 gctctgccct cgggcggacc acgcccatca tgaccttgcc aagctcgtcc tgcttctctt
     3001 cgatcttcgc cagcagggcg aggatcgtgg catcaccgaa ccgcgccgtg cgcgggtcgt
     3061 cggtgagcca gagtttcagc aggccgccca ggcggcccag gtcgccattg atgcgggcca
     3121 gctcgcggac gtgctcatag tccacgacgc ccgtgatttt gtagccctgg ccgacggcca
     3181 gcaggtaggc cgacaggctc atgccggccg ccgccgcctt ttcctcaatc gctcttcgtt
     3241 cgtctggaag gcagtacacc ttgataggtg ggctgccctt cctggttggc ttggtttcat
     3301 cagccatccg cttgccctca tctgttacgc cggcggtagc cggccagcct cgcagagcag
     3361 gattcccgtt gagcaccgcc aggtgcgaat aagggacagt gaagaaggaa cacccgctcg
     3421 cgggtgggcc tacttcacct atcctgcccg gctgacgccg ttggatacac caaggaaagt
     3481 ctacacgaac cctttggcaa aatcctgtat atcgtgcgaa aaaggatgga tataccgaaa
     3541 aaatcgctat aatgaccccg aagcagggtt atgcagcgga aaagatccgt cgacctgcag
     3601 gcatgcaagc tctagcgatt ccagacgtcc cgaaggcgtg gcgcggcttc cccgtgccgg
     3661 agcaatcgcc ctgggtgggt tacacgacgc ccctctatgg cccgtactga cggacacacc
     3721 gaagccccgg cggcaaccct cagcggatgc cccggggctt cacgttttcc caggtcagaa
     3781 gcggttttcg ggagtagtgc cccaactggg gtaacctttg agttctctca gttgggggcg
     3841 tagggtcgcc gacatgacac aaggggttgt gaccggggtg gacacgtacg cgggtgctta
     3901 cgaccgtcag tcgcgcgagc gcgagaattc gagcgcagca agcccagcga cacagcgtag
     3961 cgccaacgaa gacaaggcgg ccgaccttca gcgcgaagtc gagcgcgacg ggggccggtt
     4021 caggttcgtc gggcatttca gcgaagcgcc gggcacgtcg gcgttcggga cggcggagcg
     4081 cccggagttc gaacgcatcc tgaacgaatg ccgcgccggg cggctcaaca tgatcattgt
     4141 ctatgacgtg tcgcgcttct cgcgcctgaa ggtcatggac gcgattccga ttgtctcgga
     4201 attgctcgcc ctgggcgtga cgattgtttc cactcaggaa ggcgtcttcc ggcagggaaa
     4261 cgtcatggac ctgattcacc tgattatgcg gctcgacgcg tcgcacaaag aatcttcgct
     4321 gaagtcggcg aagattctcg acacgaagaa ccttcagcgc gaattgggcg ggtacgtcgg
     4381 cgggaaggcg ccttacggct tcgagcttgt ttcggagacg aaggagatca cgcgcaacgg
     4441 ccgaatggtc aatgtcgtca tcaacaagct tgcgcactcg accactcccc ttaccggacc
     4501 cttcgagttc gagcccgacg taatccggtg gtggtggcgt gagatcaaga cgcacaaaca
     4561 ccttcccttc aagccgggca gtcaagccgc cattcacccg ggcagcatca cggggctttg
     4621 taagcgcatg gacgctgacg ccgtgccgac ccggggcgag acgattggga agaagaccgc
     4681 ttcaagcgcc tgggacccgg caaccgttat gcgaatcctt cgggacccgc gtattgcggg
     4741 cttcgccgct gaggtgatct acaagaagaa gccggacggc acgccgacca cgaagattga
     4801 gggttaccgc attcagcgcg acccgatcac gctccggccg gtcgagcttg attgcggacc
     4861 gatcatcgag cccgctgagt ggtatgagct tcaggcgtgg ttggacggca gggggcgcgg
     4921 caaggggctt tcccgggggc aagccattct gtccgccatg gacaagctgt actgcgagtg
     4981 tggcgccgtc atgacttcga agcgcgggga agaatcgatc aaggactctt accgctgccg
     5041 tcgccggaag gtggtcgacc cgtccgcacc tgggcagcac gaaggcacgt gcaacgtcag
     5101 catggcggca ctcgacaagt tcgttgcgga acgcatcttc aacaagatca ggcacgccga
     5161 aggcgacgaa gagacgttgg cgcttctgtg ggaagccgcc cgacgcttcg gcaagctcac
     5221 tgaggcgcct gagaagagcg gcgaacgggc gaaccttgtt gcggagcgcg ccgacgccct
     5281 gaacgccctt gaagagctgt acgaagaccg cgcggcaggc gcgtacgacg gacccgttgg
     5341 caggaagcac ttccggaagc aacaggcagc gctgacgctc cggcagcaag gggcggaaga
     5401 gcggcttgcc gaacttgaag ccgccgaagc cccgaagctt ccccttgacc aatggttccc
     5461 cgaagacgcc gacgctgacc cgaccggccc taagtcgtgg tgggggcgcg cgtcagtaga
     5521 cgacaagcgc gtgttcgtcg ggctcttcgt agacaagatc gttgtcacga agtcgactac
     5581 gggcaggggg cagggaacgc ccatcgagaa gcgcgcttcg atcacgtggg cgaagccgcc
     5641 gaccgacgac gacgaagacg acgcccagga cggcacggaa gacgtagcgg cgtagcgaga
     5701 cacccgggaa gcctg
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P0583/pEGFP-Rab11a-WT人源基因质粒

P0505/pEGFP-Rab11a-S25N人源基因质粒

P0572/pEGFP-Rab11b-WT人源基因质粒

P0571/pEGFP-Rab11b-S25N人源基因质粒

P0573/pCDNA3.1-BMP4人源基因质粒

P0574/pCDNA3.1-FLAG-Ubc13人源基因质粒

P0575/pCS2-EGFP-EB3人源基因质粒

P0576/pEGFP-CagA人源基因质粒

P0581/pEGFP-IL10人源基因质粒

P0590/pCDNA3.1-V5-FLAG-USP22人源基因质粒