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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
180
- 英文名:
TSsetta(DE3) Chemically Competent Cell
- 保质期:
2年
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
冻存管
英文名称:TSsetta(DE3) Chemically Competent Cell
形式:冻存管
培养基:酵母膏:5.0,蛋白胨:10.0,NaCl:10.0,琼脂:15.0,pH:7.0±0.1(25℃)
生长条件:37℃;18-24h;好氧
存储条件:-80℃
安全等级:0
操作步骤:
1.感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻,待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中),加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰上静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌LB培养基,混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
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文献和实验摘要: 本文主要介绍了各种感受态细胞的区别、用途和特征. Xl1-Blue菌株 基因型: endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F'[Tn10 proAB+ lacIq Δ(lacZ)M15] hsdR17(rK- mK+).
菌等,前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者细胞内本就没有甲基化酶,从这些细胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割。 E.coli JM110 要排除dam,dcm甲基化的影响,需要用特定的dam-,dcm-的菌株,如JM110 如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒,则不会被甲基化. 各种感受态细胞的区别 用途 特征
本月旧帖整理活动专题: T-A克隆技术 大家可以在以下基础上进行整理或对具体问题进行讨论 (1)如何筛选合适的宿主菌株 ◇ 所选的宿主菌株应对所用质粒的抗生素抗性基因敏感。 ◇ 如进行蓝/白斑筛选,宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉(lacZΔΜ15)。TOP10和DH5α都能用于蓝/白斑筛选。 ◇ 要表达重组蛋白,可使用带有可诱导的T7 RNA聚合酶基因的菌株,如BL21(DE3)。 ◇ 使用pGEM载体克隆大片段时(>7-8 kb),经转化
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