Luminex 多因子检测技术服务

Luminex 多因子检测技术服务

1.Luminex 多因子检测技术实验原理

①Luminex多因子检测基于xMAP®技术，使用不同配比的两种红色荧光染料将聚苯乙烯微球染成不同的荧光色，获得多种荧光编码的微球 (图1)。

②将针对不同待测因子的捕获抗体通过化学反应共价偶联到特定的编码微球上，每种偶联了特异性捕获抗体的编码微球对应一种待测因子。

③将偶联有不同捕获抗体的荧光编码微球混合，加入待测样本及生物素标记的检测抗体，所形成的夹心抗体对复合物再与标记了捕获抗体荧光染料的链霉亲和素发生结合(图2)。

④微球在流动鞘液的带动下单列依次通过红绿激光，红激光用来判定微球的荧光编码，从而区分磁珠并确定待检测因子，绿激光用来测定微球上报告分子的荧光强度，该信号与结合的待测因子成正比 (图2)。从而达到快速准确的定量检测目的。

图1 编码微球的原理

图2 Luminex工作原理

2.样本制备 (干冰寄送，不接收传染样本)

注意事项：

样品至少需要稀释2倍，在检测高丰度的生物标志物时，可能需要对样品进行额外稀释，以确保样品符合标准曲线的检测动态范围。溶血、黄疸和脂血样品通常不适用于采用Luminex技术检测。请注意，以下列举样品类型没有经过所有Luminex Assay的验证。需要在使用前，阅读试剂盒的说明书，确定样品类型是否经过验证。

> 血浆：使用EDTA或肝素抗凝剂收集血浆。在收集后30分钟内，以1000 × g离心15分钟。立即检测或将样品分装后保存在-20℃或以下避免反复冻融。送样体积至少150 μL，具体实验具体分析。

> 细胞培养上清液：通过离心去除颗粒物，立即检测或将样品分装后保存在-20°C或以下。避免反复冻融。送样体积至少200 μL，具体实验具体分析。

> 组织裂解液：用PBS溶液冲洗组织，并切成1-2mm的组织块。利用组织匀浆仪对PBS溶液中的组织进行匀浆。加入等体积的细胞裂解缓冲液2(R&D Systems，货号：89534)，在室温下孵育30分钟，期间不断轻轻搅，期间不时轻轻搅拌。通过离心去除碎片。立即检测或分装后保存在-70°C或以下。避免反复冻融。送样质量大于200 mg，具体实验具体分析。

> 贫血小板血浆：收集使用EDTA或肝素作为抗凝剂的血浆。在收集后30分钟内，1000× g离心15分钟。建议在2-8℃下，10,000× g再次离心10分钟，以彻底去除血小板。立即检测或将样品分装后保存在-20°C或以下。避免反复冻融。送样体积至少200 μL，具体实验具体分析。

> 血清：使用血清分离管 (SST)，让样品在室温下凝结30分钟，1000 × g离心15分钟。收集血清立即检测，或将样品分装后保存在-20°C以下。避免反复冻融。送样体积至少200 μL，具体实验具体分析。

> 唾液：将唾液收集在管中，10,000 × g离心5分钟。收集水层，立即检测或将样品分装后保存在-20°C或以下。避免反复冻融。

> 尿液：以无菌方式收集当天的第一次尿液(中段尿)，直接收集在无菌容器中。16,000× g离心4分钟，以除去颗粒物。立即检测或分装后保存在-20°C或以下。避免反复冻融。送样体积至少200 μL，具体实验具体分析。

> 人类乳汁：立即检测或将样品分装后保存在-20°C或以下。避免反复冻融。

试剂盒的选择：

可以检测的种属为人、小鼠、大鼠、猪、猴等样品。