心肌细胞缺氧模型构建

【实验方案】

一、研究对象：H9C2细胞株

二、研究药物：1种测试药

三、H9C2心肌细胞缺氧／复氧(hypoxia／reoxygenation，H/R)模型的构建

遵守快融的原则。先将水浴锅调至37℃，从液氮罐里拿出冻存管迅速投入37℃温水中，并轻轻摇动使其内容物迅速融化（最好在1 min以内），取出冻存管，微微上下晃动冻存管，用75%酒精消毒后开启，用吸管吸出溶解后的细胞悬液，注入离心管并加入5mL的含10%胎牛血清（FBS）的细胞培养液。以1000rpm离心5min，除去上清液，加入1 mL培养液吹打，使其形成悬浮液。用含20%FBS的细胞培养液适当稀释后，接种到培养瓶，置于37℃、饱和湿度、5%CO2孵箱中培养，24h后更换一次培养液，随后视细胞生长情况及培养液颜色（一般待培养液变黄）更换培养液，继续培养。于 5% CO2加95 %N2孵箱中培养4h以模拟缺血环境，而后将细胞置于含 10％胎牛血清的高糖DMEM培养基中常规培养24h，模拟再灌注环境。

四、药物****对缺氧/复氧心肌细胞模型的生物学功能的影响与机制研究

（一）CCK-8检测药物处理对心肌细胞缺氧/复氧的影响

（二）QPCR检测Y基因的表达水平。

（二）Western Blot检测x蛋白的表达水平。

（四）流式细胞仪检测各组细胞凋亡水平。

【结果展示】

1、CCK-8检测药物处理对心肌细胞缺氧/复氧的影响

2、药物****对缺氧/复氧心肌细胞模型的生物学功能的影响与机制研究

 

【实验方案】

一、研究对象：H9C2细胞株

二、研究药物：1种测试药

三、H9C2心肌细胞缺氧／复氧(hypoxia／reoxygenation，H/R)模型的构建

遵守快融的原则。先将水浴锅调至37℃，从液氮罐里拿出冻存管迅速投入37℃温水中，并轻轻摇动使其内容物迅速融化（最好在1 min以内），取出冻存管，微微上下晃动冻存管，用75%酒精消毒后开启，用吸管吸出溶解后的细胞悬液，注入离心管并加入5mL的含10%胎牛血清（FBS）的细胞培养液。以1000rpm离心5min，除去上清液，加入1 mL培养液吹打，使其形成悬浮液。用含20%FBS的细胞培养液适当稀释后，接种到培养瓶，置于37℃、饱和湿度、5%CO2孵箱中培养，24h后更换一次培养液，随后视细胞生长情况及培养液颜色（一般待培养液变黄）更换培养液，继续培养。于 5% CO2加95 %N2孵箱中培养4h以模拟缺血环境，而后将细胞置于含 10％胎牛血清的高糖DMEM培养基中常规培养24h，模拟再灌注环境。

四、药物****对缺氧/复氧心肌细胞模型的生物学功能的影响与机制研究

（一）CCK-8检测药物处理对心肌细胞缺氧/复氧的影响

（二）QPCR检测Y基因的表达水平。

（二）Western Blot检测x蛋白的表达水平。

（四）流式细胞仪检测各组细胞凋亡水平。

 

 

【结果展示】

1、CCK-8检测药物处理对心肌细胞缺氧/复氧的影响

2、药物****对缺氧/复氧心肌细胞模型的生物学功能的影响与机制研究