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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
10T/20T/40T
- 英文名:
Silver Stain Kit
- 保质期:
参照shuomingshu
- 供应商:
武汉金开瑞生物工程有限公司
- 保存条件:
参照shuomingshu
- 规格:
详情咨询
实验原理
银染是检测聚bingxixianan凝胶中的蛋白质,是银离子在碱性pH环境下被还原成金属银,沉淀在蛋白质的表面上显色的原理。
试剂盒组分、操作步骤等更多细节请查看zuixinban说明书
注意事项:
由于银染非常灵敏,操作时请注意尽量使用高纯度的水,并确保所使用的器皿非常清洁,最好使用洁净的玻璃器皿。操作时必须戴手套,避免皮肤和凝胶直接接触。
需自备乙醇、乙酸、wuerquan、去离子水及甲醇。
银溶液有腐蚀性,操作时请小心,并确保有效防护以避免直接接触人体,并须注意避免腐蚀其它物品,对水生生物有毒或有害,禁止直接排入环境。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
常见问题
Q1:凝胶上出现小点或其它非蛋白的痕迹或背景太深:
1.凝胶没有充分被溶液浸没。请注意选择大小合适的容器,并加入足量的各种溶液,同时需保持适当 的混匀速度确保凝胶可以被溶液浸没。
2.用于银染的容器没有充分洗涤干净。容器可用洗洁精充分洗涤,随后用自来水充分冲洗,最后用高纯度水再洗涤数次。
3.指纹或其它压痕。请注意戴手套操作,切勿直接接触皮肤。操作时请注意尽量不要挤压、折叠或摩擦凝胶。
4.有金属物质接触凝胶。金属物质例如金属镊子等接触凝胶会出现非特异性痕迹。 显色时间过长。通常显色反应会在10分钟内结束,显色反应时间过长会导致背景很深。
5.洗涤不充分。洗涤时间过短,或洗涤液加入的量不足,或者容器过于狭小导致摇动时溶液不易充分混合,或摇动速度过慢,导致混匀不充分。
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1、ChIP技术的实验步骤
● 交联:将细胞或组织交联,以固定蛋白质与DNA的相互作用。通常使用甲醛进行细胞或组织的交联。
● 细胞核提取:将交联后的细胞或组织进行细胞核提取,以获得染色质蛋白质复合物。
● DNA剪切:使用限制性酶、酶切酶或超声波等方法将染色质剪切成适当的片段。这样可以将特定蛋白质结合的DNA片段保留下来。
● 免疫沉淀:将剪切后的染色质蛋白质复合物与特定抗体进行免疫反应,使蛋白质与抗体结合。这样可以选择性地富集与特定蛋白质结合的DNA片段。
● 洗涤:将免疫沉淀复合物进行多次洗涤,以去除非特异性结合的DNA和其他杂质。
● 解交联:去除细胞或组织中的交联,使DNA片段恢复到原始的非交联状态。
● DNA纯化:从免疫沉淀复合物中纯化富集的DNA片段。这可以通过酚/氯仿提取、柱层析或商业DNA纯化试剂盒等方法完成。
● DNA分析:对纯化的DNA片段进行进一步的分析,如定量PCR、实时荧光PCR、测序或芯片芯片分析等。
2、ChIP-qPCR技术的应用
● 确定特定转录因子与基因启动子的结合:ChIP-qPCR可以用于验证特定转录因子与目标基因启动子的结合,从而确定转录因子对该基因的调控作用。
● 研究表观遗传修饰和染色质状态:ChIP-qPCR可以用于分析特定表观遗传修饰标记(如组蛋白修饰)与染色质区域的结合情况,揭示染色质状态和基因表达调控之间的关系。
● 验证转录因子结合位点的功能:通过ChIP-qPCR分析不同转录因子结合位点的富集程度,可以确定这些结合位点在基因调控中的功能重要性。
● 研究疾病相关基因的调控:ChIP-qPCR可以用于研究疾病相关基因的调控机制,例如确定转录因子与致病突变基因的结合情况,了解其对基因表达的影响。
3、ChIP-qPCR技术、ChIP-seq和ChIP-chip技术的对比区别
| 技术 | ChIP-seq | ChIP-chip | ChIP-qPCR |
| 概念 | 通过测序分析确定蛋白质与染色质上特定 | 利用芯片技术检测蛋白质与染色质上特定 | 利用定量PCR分析蛋白质与染色质上特定 |
| DNA序列的结合情况。 | DNA序列的结合情况。 | DNA序列的结合情况。 | |
| 优势 | - 高通量分析 | - 适用于小样本量 | - 高灵敏度和特异性 |
| - 可全基因组范围的研究 | - 成本相对较低 | - 适用于小样本量 | |
| - 高灵敏度和特异性 | - 结合位点鉴定和分析 | - 特定基因或区域的分析 | |
| - 不依赖先验知识 | |||
| - 结合位点鉴定和分析 | |||
| 劣势 | - 数据分析复杂 | - 有限的基因覆盖范围 | - 无法进行全基因组范围的研究 |
| - 需要大量测序深度 | - 需要先知道结合位点的区域 | - 仅限于已知的目标基因或区域分析 | |
| - 依赖参考基因组的质量 | |||
| 应用领域 | - 转录因子结合位点鉴定 | - 转录因子结合位点鉴定 | - 转录因子结合位点鉴定 |
| - 基因调控机制研究 | - 表观遗传学研究 | - 基因调控机制研究 | |
| - 表观遗传学研究 | - 疾病相关研究 | - 疾病相关研究 | |
| 举例 | - 确定转录因子X结合位点在肿瘤细胞中的分布情况 | - 分析组蛋白修饰酶在不同发育阶段的结合位点 | - 研究转录因子Y在疾病模型中的结合位点变化 |
金开瑞-提供核酸和蛋白的整体研究方案:
武汉金开瑞生物工程有限公司是一家专业致力于为全球制药企业、诊断试剂企业、科研试剂研发企业、高校和科研院所以及大型医院提供蛋白及相关研究技术服务的高新技术企业。金开瑞极其注重平台技术提升,现已有多项自主知识产权和软件著作权专利,并已通过ISO9001质量管理体系认证,2018获批“千企万人”支持计划。公司以“细胞外囊泡”研究中心、基础生物医学实验中心、蛋白抗体中心和分子生物学中心为依托,提供核酸和蛋白的整体研究方案,与众多科研单位携手开展了大量的探索项目。截止到目前,已支持客户发表科研论文达1000+篇,累计影响因子6000+。
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