GFP-Agarose免疫沉淀试剂盒

                                      GFP-Agarose 免疫沉淀试剂盒
                              （PROCAP GFP-Agarose IP/CoIP KIT）

产品货号：PGA025、PGA050
存储条件：IP buffer存储于-20°C，GFP-Agarose beads可在4℃保存1年，或在-80℃长期保存。请根据各组分适合储存条件存放，并避免反复冻融。

试剂盒组分：

货号	名称	规格
GNA-25-500/GNA-50-1000	GFP-Nanoab-Agarose	500ul(25T)/1000ul(50T)
IP001A	裂解液A	50ml
IP001B	裂解液B	50ml
IP001C	漂洗液C	50ml
IP001D	漂洗液D	50ml
IP001E	洗脱液E	3x1ml

产品简介
LABLEAD的免疫沉淀beads是基于基因工程改造的纳米抗体开发的；纳米抗体由传统抗体的重链可变区（VHH）组成，具有分子量小、亲和力高、特异性强，且耐酸碱高温环境等特点；基于纳米抗体的优点，LABLEAD的免疫沉淀beads避免了免疫沉淀结果出现轻重链污染的现象，并且节省实验时间。
实验步骤
提示：尽量在4℃进行操作，洗脱蛋白方法一除外。
1.收集细胞：
根据实验要求收集适量的细胞，通常每个免疫沉淀反应大约使用 10⁶-10⁷ 个细胞。
2.裂解细胞：
根据实验要求选择使用溶液A或溶液B裂解细胞。在溶液A或溶液B中加入蛋白酶抑制剂，用500μl预冷的溶液A或溶液B重悬细胞；置于冰上30分钟，可每10分钟充分吹打一次；4℃，20,000g离心15分钟，将裂解产物（上清）转移到一个新的预冷管中，丢弃沉淀。
3.平衡珠子：
振荡充分混匀珠子， 吸取20μl GFP-Nanoab-Agarose beads到500μl预冷的溶液A或溶液B中，4℃，2,500g离心2分钟，或利用磁性分离，丢弃上清液。
4.结合蛋白：
将平衡好的beads加入到细胞裂解产物中，于4℃旋转混合结合30min-1h。
5.清洗珠子：
根据实验要求选择使用溶液C或溶液D清洗beads。4℃，2,500g离心2分钟，或利用磁性分离，丢弃上清液。用500μl预冷的溶液C或溶液D重悬beads，4℃，2,500g条件下离心2分钟，或利用磁性分离，丢弃上清液并重复洗涤3次。
6.洗脱蛋白
方法一：
加入20μl 2×SDS-sample buffer重悬beads。95℃，加热10min充分变性，2,500g离心2分钟或利用磁性分离收集上清，收集的产物可进行SDS-PAGE及免疫印迹分析。
方法二：
加入溶液E洗脱结合的蛋白，孵育时间30秒，期间不断混匀，2,500g离心2分钟或利用磁性分离收集上清，为了中和酸性的甘氨酸，需加入5μl 1.0 M Tris（pH10.4）。
注意：为了提高洗脱效率可以重复这一步。收集的产物可进行SDS-PAGE及免疫印迹分析。
注意事项
1、关于裂解液的选择：裂解液A为温和裂解液，裂解液B为强裂解液，请根据自己实验样本选择相应的裂解液，如：若为胞质蛋白可选裂解液A或者A与B混合使用，若为核蛋白则可选择裂解液B。