- ￥2298.75
- LABLEAD
- PGA025
- 2026年04月18日
企业认证
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- 详细信息
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- 文献和实验
- 技术资料
- 规格：
25T
（PROCAP GFP-Agarose IP/CoIP KIT）
产品货号：PGA025、PGA050
存储条件：IP buffer存储于-20°C，GFP-Agarose beads可在4℃保存1年，或在-80℃长期保存。请根据各组分适合储存条件存放，并避免反复冻融。
试剂盒组分：
| 货号 | 名称 | 规格 |
| GNA-25-500/GNA-50-1000 | GFP-Nanoab-Agarose | 500ul(25T)/1000ul(50T) |
| IP001A | 裂解液A | 50ml |
| IP001B | 裂解液B | 50ml |
| IP001C | 漂洗液C | 50ml |
| IP001D | 漂洗液D | 50ml |
| IP001E | 洗脱液E | 3x1ml |
产品简介
LABLEAD的免疫沉淀beads是基于基因工程改造的纳米抗体开发的；纳米抗体由传统抗体的重链可变区（VHH）组成，具有分子量小、亲和力高、特异性强，且耐酸碱高温环境等特点；基于纳米抗体的优点，LABLEAD的免疫沉淀beads避免了免疫沉淀结果出现轻重链污染的现象，并且节省实验时间。
实验步骤
提示：尽量在4℃进行操作，洗脱蛋白方法一除外。
1.收集细胞：
根据实验要求收集适量的细胞，通常每个免疫沉淀反应大约使用 106-107 个细胞。
2.裂解细胞：
根据实验要求选择使用溶液A或溶液B裂解细胞。在溶液A或溶液B中加入蛋白酶抑制剂，用500μl预冷的溶液A或溶液B重悬细胞；置于冰上30分钟，可每10分钟充分吹打一次；4℃，20,000g离心15分钟，将裂解产物（上清）转移到一个新的预冷管中，丢弃沉淀。
3.平衡珠子：
振荡充分混匀珠子， 吸取20μl GFP-Nanoab-Agarose beads到500μl预冷的溶液A或溶液B中，4℃，2,500g离心2分钟，或利用磁性分离，丢弃上清液。
4.结合蛋白：
将平衡好的beads加入到细胞裂解产物中，于4℃旋转混合结合30min-1h。
5.清洗珠子：
根据实验要求选择使用溶液C或溶液D清洗beads。4℃，2,500g离心2分钟，或利用磁性分离，丢弃上清液。用500μl预冷的溶液C或溶液D重悬beads，4℃，2,500g条件下离心2分钟，或利用磁性分离，丢弃上清液并重复洗涤3次。
6.洗脱蛋白
方法一：
加入20μl 2×SDS-sample buffer重悬beads。95℃，加热10min充分变性，2,500g离心2分钟或利用磁性分离收集上清，收集的产物可进行SDS-PAGE及免疫印迹分析。
方法二：
加入溶液E洗脱结合的蛋白，孵育时间30秒，期间不断混匀，2,500g离心2分钟或利用磁性分离收集上清，为了中和酸性的甘氨酸，需加入5μl 1.0 M Tris（pH10.4）。
注意：为了提高洗脱效率可以重复这一步。收集的产物可进行SDS-PAGE及免疫印迹分析。
注意事项
1、关于裂解液的选择：裂解液A为温和裂解液，裂解液B为强裂解液，请根据自己实验样本选择相应的裂解液，如：若为胞质蛋白可选裂解液A或者A与B混合使用，若为核蛋白则可选择裂解液B。
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文献和实验，包括抗体的选择、用超声波剪切染色质的条件和免疫沉淀DNA的分析。Active Motif公司的ChIP-IT Kit完全地解决了所有这些与ChIP方法有关的潜在的问题。Active Motif ChIP-IT Kit含有ChIP分析的25个反应所需的所有试剂。另外，这种试剂盒还备有一个详细的指南――为实验方案的优化节约了时间。指南中的方案容易遵循，甚至是对于新手也是如此。ChIP-IT试剂盒的最大的优点是同时具备正向（anti-TFIIB）和负向（negative IgG）对照抗体。 美国
将其稀释至 1 mg/mL 以降低缓冲体系中去污剂的浓度（但对于那些在细胞中表达水平较低的蛋白而言，10 mg/mL 这样更高的浓度可能对免疫沉淀更有效一些）。 加入推荐体积的免疫沉淀抗体至 500 µL 细胞裂解液中与目标蛋白反应。（抗体的最适用量要根据每一细胞模型中免疫沉淀靶蛋白的数量来确定）。 将细胞裂解液与抗体轻轻混匀后孵育 2h，或 4℃ 缓慢振荡过夜。（选择孵育 2h 常用于免疫沉淀与激酶或磷酸酯酶作用的活化酶。）加入100 µL Agarose protein A+G 轻轻振荡 1h
量的抗体，同时对免疫沉淀体系也需要有严格的控制指标。免疫沉淀实验从：蛋白样品处理；抗体-agarose beads孵育；抗体-agarose beads复合物洗涤到最后的鉴定，每步都非常关键，需要严格控制实验流程中每个关键步骤的质量，才能最终达到你的实验目的。 IP实验步骤 基本实验步骤 1. 收获细胞，加入适量细胞IP裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上或者4℃裂解30 min， 12 000g离心30 min后取上清； 2. 取少量裂解液以备Western blot分析，剩余
