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北京安必奇生物
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Knockdown(基因敲低)稳定细胞系构建服务
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(dsRNA)诱发的基因沉默现象,其机制是通过阻碍特定基因的转录或翻译来抑制基因表达。基因沉默可以通过导入与内源性mRNA同源的dsRNA来实现:1)转染人工合成的siRNA(short interfering RNA)片段;2)质粒转染或病毒转导shRNA(short hairpin RNA)。与siRNA相比,shRNA的作用方式是利用载体把shRNA导入细胞核内,可以稳定地整合到基因组中,被传递到子代细胞中去,从而使基因的沉默可被遗传。
尤其是在基因敲除致死的情况下,Knockdown(基因敲低)稳定细胞系在研究基因功能、设计疾病模型、生物制药研究、药物发现等诸多应用中发挥着重要作用。

安必奇拥有成熟的稳定细胞系构建平台,提供shRNA基因沉默服务。从目标基因shRNA的设计合成到载体的构建,慢病毒包装、转染/转导靶细胞后筛选获得敲低效率高的稳定细胞系,可以为您提供一站式全方位的技术服务。
应用领域
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研究基因的功能及表达调控机制
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寻找合适药物作用靶点
我们的优势
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拥有成熟的稳定细胞系构建平台和很棒的科研团队,从shRNA设计到产品交付的整个过程都由经验丰富的专业人员管理
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严格的质量控制体系:细胞系无真菌、细菌和支原体污染
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丰富的宿主细胞类型:THP-1、MCF7、A549、HeLa、HEK293、HepG2 等多种人源/鼠源细胞
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敲低效率显著
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遗传稳定
服务流程

案例分析
案例1:HeLa-Human-PARP1-Knockdown细胞系

图1. Real-Time qPCR检测Human-PARP1的相对表达量
案例2:HeLa-Human-PARP2 Knockdown细胞系

图2. Real-Time qPCR检测Human-PARP2的相对表达量
案例3:MCF7-Human-ROCK1 Knockdown细胞系

图3. Real-Time qPCR检测Human-ROCK1的相对表达量
案例4:MCF7-Human-ROCK2 Knockdown细胞系

图4. Real-Time qPCR检测Human-ROCK2的相对表达量
案例5:THP1-Human-MERTK Knockdown细胞系

图5. Real-Time qPCR检测Human-MERTK的相对表达量
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文献和实验可以对所有细胞系和大多数常用实验动物的遗传物质进行改造。CRISPR 技术在人类遗传性疾病、病毒感染疾病和癌症的相关研究中具有广阔前景和巨大发展潜力。 操作流程: 1、靶位点确认及 sgRNA 设计 2、构建哺乳动物细胞 Cas9/sgRNA 载体 3、sgRNA 活性验证 4、细胞转染 5、筛选特定表型细胞 6、基因组 NGS 测序 7、建立稳定敲除的细胞株 研究思路: 1. 哺乳动物细胞基因敲除(knock-out)/敲入(knock-in) (1)sgRNA 设计 基因组定制化的 sgRNA 设计
这里说的稳转细胞系的构建是指慢病毒转染构建的稳转细胞系,可以构建表达细胞系,也能构建敲降细胞系,经常有人问我什么叫稳转和顺转的区别。瞬转细胞系,一般情况下能够稳定表达最多长一周左右,而稳转细胞系,只要构建成功就能稳定表达,没有时间限制,但是也不是肯定的,一般实验构建的细胞系超过 10 代以后,这个细胞系就有可能不靠谱了。接下来,咱们讲讲稳转细胞系的构建。一般来讲 shRNA 用的是 HIV 病毒,虽然已经经过处理,但是一听这名字也觉得渗人,无论如何保护自己是在实验室永葆青春的基础,所以一定
移植动物模型肿瘤生长及转移速度较快,可用来评价乳腺癌发生发展及转移过程中免疫应答的作用。异种移植一般采用人源组织或细胞接种于免疫缺陷小鼠(如重度免疫缺陷鼠 NCG),能模拟人恶性肿瘤成瘤后过程,可用于基础和临床研究。但人乳腺癌存在不同的分子分型,且人乳腺癌细胞系相对于其他癌种成瘤难度更大,且不稳定,因此选择合适的细胞系也十分重要。针对乳腺癌不同的分子分型,集萃药康细胞资源库配备丰富的乳腺癌细胞株以及热门靶点人源化改造的细胞资源,用于构建乳腺癌移植瘤模型。 表 1. 部分集萃药康乳腺癌细胞资源展示
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