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- 稳定细胞株构建，通常是将外源基因克隆到不同抗性的载体中，根据载体中所含有的不同抗性标志，来选用相应的药物对靶细胞进行筛选。
- 2026年01月01日
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- 服务名称：
稳定株构建
- 提供商：
OBiO和元生物
1、技术简介：
稳定细胞株构建，通常是将外源基因克隆到不同抗性的载体中，根据载体中所含有的不同抗性标志，来选用相应的药物对靶细胞进行筛选。和元生物最常用的抗性标记基因有潮霉素（hygromycin）、新霉素（neomycin）和嘌呤霉素（puromycin），一般常用Hygromycin B、G418和puromycin来进行选择性筛选。
利用慢病毒整合到宿主基因组的特性来筛选稳定株的方法克服了传统方法的弊端，可以在短时间内获得高效率的稳定细胞株。筛选得到的细胞或者可稳定表达目的蛋白，用于蛋白的扩增和富集；或者得到稳定沉默特定基因的细胞株。和元生物拥有包含440多株细胞的资源库，为稳转细胞株的构建提供了必要的资源条件。
2、技术及服务特点：
1）细胞使用种类广泛，可用于各种哺乳动物细胞；
2）稳定株构建时间短、表达持续时间长；
3）多种荧光标记和抗性基因可选，满足各类实验需求。
3、服务流程：
1）客户提供：目的细胞及信息、目的基因及信息、其他特殊要求；
2）实验过程：细胞复苏培养、细胞感染预实验、质粒构建与抽提、慢病毒包装与纯化、稳定株筛选及鉴定；
3）交付内容：目的基因稳定株及对照稳定株实验报告
4、实验案例图：
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5、其他相关技术：
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文献和实验重组插入目的片段，启动子，终止子等是构建完整表达框时所需要的元件，标签序列等可以用于表达鉴定等实验。在质粒载体设计及构建工作中，根据实验的需求情况可以增减质粒载体上的具体元件，以及插入实验需要的相关基因。 2、质粒载体构建的常规流程 通常质粒载体构建的操作需要经过下图所示流程。其中目标序列确定需要根据实验需求以及查阅生物信息数据库的相关序列来确定。目标序列 PCR 扩增则根据实验需求以基因组 DNA 或者反转录得到的 cDNA 为模板，经过高保真 PCR 实验扩增得到相关目的片段。质粒载体确定由实验
效应机制siRNA不仅可引导RISC切割靶RNA,而且可作为引物在RNA依赖的RNA聚合酶(RdRP)作用下以靶mRNA为模板合成新的dsRNA新合成的长链dsRNA同样可被RNaseⅢ样核酸酶切割、降解而生成大量的次级siRNA.次级siRNA又可进入合成-切割的循环过程,进一步放大RNAi作用.这种合成-切割的循环过程称为随机降解性PCR（random degradative PCR）.三、RNAi表达载体的构建1. 目的基因的确定（1）、检索文献获取有实验证明有效的靶点序列（核对
lxqsh 现在有一株稳定细胞株，这株细胞在构建质粒的时候用的是带EGFP荧光（绿色）的载体，现在打算在这个稳定细胞株的基础上包病毒，可是包装体系里的空载也是绿色荧光，因为两种空载都是带绿色荧光的，不知道如果确定包病毒的效率及如何筛选稳定细胞？希望大家多多指教~ david_xmu 有更具体的信息没？比如你的细胞株名称，病毒是慢病毒还是腺病毒？你的病毒包装质粒图谱？一般都会有筛选marker的，比如G418
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