Cas9稳定细胞系构建服务

CRISPR-Cas9是继ZFN、TALENs等基因编辑技术推出后的第三代基因编辑技术，因其效率高、简便、成本低，已成为当今主流的基因编辑技术之一。工程化的CRISPR/Cas9 系统由两部分组成：具有导向功能的single guide RNA (sgRNA)和行使DNA切割功能的Cas9 核酸内切酶。当细胞内同时表达 Cas9 蛋白和 sgRNA时，Cas9蛋白结合sgRNA靶向到目的DNA序列，诱导DNA双链断裂 (DSB)，引发细胞内部的DNA修复机制：（1）如果有DNA修复模板进入到细胞中，DSB依据修复模板，通过同源重组修复（HDR）途径对断裂DNA进行修复，从而实现基因敲入、替换或点突变；（2）当未提供 DNA 修复模板时，细胞会通过非同源末端连接方式（NHEJ）对断裂DNA进行修复，修复过程中通常会发生碱基插入或缺失的错配现象造成移码突变，从而实现基因敲除（Knock-out）。 除了传统的SpCas9，SpCas9-HF1、SaCas9等其他版本的Cas9系统也已广泛应用于基因编辑。

安必奇有多年的稳定细胞系构建经验，可以根据您的科研需求将 Cas9核酸酶基因稳定整合到您所指定的宿主细胞基因组。

应用领域

• sgRNA高通量筛选

• 基因编辑理想的细胞模型，包括基因敲除、基因敲入、基因诱变、基因标记等

• 基因功能的研究

我们的优势

• 拥有成熟的稳定细胞系构建平台和很棒的技术团队

• 灵活的细胞系构建策略：脂质体转染法、电穿孔法和病毒转导法

• 严格的质量控制体系：细胞系无细菌、真菌和支原体污染

• 分离单克隆细胞，保证单一基因背景下持续、高水平的表达Cas9蛋白

• Cas9 稳定整合使sgRNA共转染或共转导更易操作

• 用T7 Endonuclease I对Cas9活性进行功能验证

• 丰富的宿主细胞类型：肝癌细胞、乳腺癌细胞、结肠癌细胞、肺癌细胞、胰腺癌细胞、胃癌细胞、胚胎肾细胞等

服务流程

 

案例分析

案例1：HEK293T-SpCas9细胞系T7EI检测结果