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北京安必奇生物
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CRISPR/CAS9脱靶效应分析服务
CRISPR/Cas9技术作为第三代基因组编辑技术,凭借其操作简单、价格低廉和编辑效率高等优点已经广泛的应用于生物工程、医疗、农业和环境等领域的研究,并且参与推动药物开发、免疫治疗和基因治疗领域的突破。和TALEN和ZFNS技术一样,CRISPR/Cas9技术在应用时也存在一定概率的脱靶问题——Cas9核酸酶在非目标位点发生切割,引入非预期的基因突变。脱靶切割引入的突变可能会直接破坏细胞的基本功能,带来不可预控的严重后果。因此,为了提高CRISPR技术在临床研究上的安全性,通过高灵敏度的全基因组脱靶效应检测优选脱靶效应低的实验方案是推进基因编辑技术走向临床应用的关键。
安必奇生物建立了有效成熟的基因组编辑、高通量测序和生物信息学分析平台,为客户提供全面准确的CRISPR/Cas9脱靶效应检测和分析服务。我们的检测方法包括全基因组测序、GUIDE-Seq和CIRCLE-Seq。
安必奇生物提供sgRNA脱靶效应评估服务,帮助您挑选高度特异,脱靶率低的sgRNA进行后续实验。同时,我们也协助您检测分析基因编辑后细胞样品的脱靶情况,通过各种高通量测序检测技术,我们能准确的分析全基因组范围内的脱靶位点,推动CRISPR/Cas9技术在治疗药物开发和临床研究中的应用。
我们的优势
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灵敏度高:能检测低频脱靶突变
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准确性高:检测结果可通过实验验证
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多种检测方法可选择以满足不同的实验需求
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文献和实验【交流】哈佛大学实验室发现CRISPR/Cas9存在严重脱靶效应
基因组上的特定位点完成切割反应,同时CRISPR/Cas9的切割也依赖于gRNA和基因组特定位点配对区5′端的PAM结构,这也进一步限制了gRNA的设计。更为重要的是,文献中报道CRISPR/Cas9存在严重的脱靶效应,此特性的存在一方面对细胞水平的打靶在基因功能的研究会造成混乱的局面,很难分析某功能的缺失是由哪个基因的敲除引起的,另一方面在动物模型应用中,CRISPR/Cas9的脱靶性尽管可以通过多代交配的方式稀释脱靶,但是这个过程会增加工作量和科研经费的开支,因此限制了CRISPR/Cas9的应用。
北大伊成器团队 Nature Method 发文,揭示单碱基编辑脱靶风险!
2018 年,南方科技大学贺建奎团队使用 CRISPR 基因编辑技术进行人体基因编辑,露露和娜娜两名婴儿因此降生。 这次冒进的实验,很快在全世界掀起轩然大波,引发了人类对基因编辑技术应用的深思。 贺建奎事件之所以造成如此大的轰动,不仅是因为他逾越了医学伦理的边界,更是因为他让两名婴儿暴露在了基因编辑技术最大的风险之下,那就是「脱靶效应」。 尽管学术界已经对 CRISPR 技术的安全性做了大量改进与研究,我们依旧无法摆脱基因编辑脱靶所带来的严重后果。一次错误的编辑,足以给人体带来不可挽回的严重
可能促进脱靶效应,这阻碍了其应用于需要高精确度的基因组编辑。而 IDLV 适合递送 Cas9 组分至静息细胞,更适合临床研究,目前已有相关研究成果发表。 作者设计了针对 GFP 的靶点,分别以 LV、IDLV 感染 HEK293T 细胞,在第 7 天提取细胞做全外显子组测序(WES)分析,鉴定出了 16 个基因存在脱靶 4: 载体构建示意图 WES 鉴定脱靶的基因 LV 诱导的插入缺失的频率在 3.4%-24%(深线),而 IDLV 显示出较弱的诱导脱靶插入缺失的能力 0%-6.5%(浅线











