- ￥16800
- 艾迪基因敲入：精准靶向，高保真表达，稳定表达验证，助您加速课题进展
- 广州
- 2025年10月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
艾迪基因
- 服务名称：
基因编辑服务
- 规格：
株
▍基因敲入细胞
基因定点敲入（KI，gene knock in）是指外源DNA片段插入到指定的基因组位置，使该片段行使相应的功能。可以赋予细胞或生物体新的功能或恢复缺陷基因的正常功能，可用于研究基因功能与调控机制、构建疾病模型或开展基因治疗。
▍服务详情
| 细胞类型 | 各种细胞类型，包括肿瘤、常规、干细胞、原代和永生化细胞系 |
|---|---|
| 服务类型 |
· 荧光蛋白定点敲入（EFGP、Luc、mCherry等） · 标签蛋白定点敲入（Flag、HA、Myc、HiBiT等） · 特定位点敲入 · 基因点突变 |
| 交付标准 | 基因敲入单克隆细胞1株（2管细胞，1×10^6/管） |
| 周期 | 现货1周 （查看现货）；定制快至8周 |
| 价格 | 16800元起 ；具体可来电咨询18102225074 |
▍基因敲入/点突变细胞系
艾迪基因全新推出点突变细胞现货库，并持续进行丰富与补充。大部分点突变细胞株通过先导基因编辑技术构建，该技术无需断裂DNA双链，具有编辑效率高、纯合概率大、无脱靶风险等特点。这些细胞株活性高，并且均通过了艾迪基因严格的质控：包括包括细胞STR鉴定和无菌无支原体检测，Sanger测序验证。这些基因点突变现货细胞株可马上用于您的研究，简化您的实验流程和加速研究进度。
▍基因敲入技术原理
DNA双链断裂（DSB）是基因敲入的关键步骤，这一损伤会触发细胞中的两种DNA修复机制：非同源末端连接（NHEJ）和同源定向修复（HDR）。基因敲入技术的核心是gRNA或crRNA引导Cas酶切割目标位点的DNA双链，细胞利用外源提供的Donor为模板，基于HDR或NHEJ机制将目标基因序列精确地敲入到基因组的特定位置。
| 技术类型 | 效率 | 优点 | 适用场景 |
|---|---|---|---|
| CRISPR/HDR | 5-30% | 灵活性高，支持点突变和片段插入 | 分裂较活跃细胞 |
| CRISPaint | 20-50% | 不依赖细胞周期 | 分裂周期长的细胞 |
| Bingo™ | 30-80% | 无DSB或供体模板，脱靶风险低 | 精准敲入小片段或点突变修复 |
| HES-KI | 40%-90% | 独特筛选机制介导高效敲入 | 重要基因位点C端敲入 |
应用范围
● 工业生产：目的基因表达高稳定性和均一性，保障了产品大规模生产的产量和质量。
● 基因治疗：确保细胞治疗中治疗性基因的稳定整合。
● 干细胞工程：在IPSC中实现了高效率的转基因敲入。
● 功能基因组学：筛选必需基因的功能域或调控元件。
● 疾病建模：构建符合生理表达水平的基因修饰细胞系。
HES-KI技术
▍HES-KI技术原理
HES-KI（重要基因位点敲入）是一种新型的敲入技术，通过在重要基因的C端外显子区域进行CRISPR编辑，并设计一个转基因敲入模板，使得成功敲入的细胞能够恢复重要基因的功能，同时整合敲入的基因序列；如果未成功敲入细胞，如NHEJ介导的有插入或缺失（indels）的细胞，将导致重要基因功能丧失，使细胞无法存活，从而实现对成功敲入细胞的富集。
▍HES-KI技术优势
▍HES-KI成功案例
• 使用HES-KI技术在K562细胞GAPDH中敲入EGFP，未使用抗性筛选情况下多克隆的敲入效率达到37%
• K562 EGFP-KI细胞和WT细胞单克隆细胞株倍增时间差异不显著，EGFP插入后不影响K562细胞生长。
| K562 EGFP-KI 多克隆 | |
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| K562 EGFP-KI 单克隆 | |
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• 使用HES-KI技术，293T多克隆细胞中，EGFP的敲入效率达到68%。在CHO-K1多克隆细胞中，EGFP的敲入效率达到55%。
• 293T和CHO-K1 EGFP-KI多克隆细胞图片
| 293T | CHO-K1 |
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CRISPaint基因敲入
▍CRISPaint技术原理
CRISPaint是一种基于CRISPR-Cas9系统的基因敲入技术，通过利用细胞自身的非同源末端连接（NHEJ）修复机制，能够在指定的基因C端位置敲入外源DNA片段，无需依赖同源重组（HDR）。CRISPaint的设计具有高度的灵活性，适用于多种基因功能研究和基因组编辑应用。1、CRISPR-Cas9引导的双链断裂（DSB）
Target sgRNA质粒：切割基因特定位置，导致DNA双链断裂，激活细胞的DNA修复机制。
2、通用Donor载体设计
CRISPaint使用一种通用的供体DNA模板，通过以下组分实现CRISPaint系统灵活的敲入策略：
Frame sgRNA质粒：切割Donor质粒，在细胞内形成线性化模版；有3种Frame-sgRNA可供选择，保证敲入基因正确OFR序列表达。
通用Donor质粒：包含待插入的基因序列（如荧光蛋白）和3种Donor-sgRNA的靶点序列。
3、非同源末端连接（NHEJ）
靶点基因形成DSB和Donor被切割，细胞通过NHEJ修复机制，将线性化的Donor模版整合至DSB位置，实现了高效的基因敲入。
CRISPaint技术优势
▍CRISPaint实验流程
▍CRISPaint成功案例
• Sanger测序验证Neo精确敲入至H9细胞A基因C端
Bingo™介导基因敲入
▍Bingo™技术原理
Bingo™ 是一种基于Prime Editing介导小片段敲入的基因编辑技术，能够在不依赖DNA双链断裂的情况下，实现对目标基因的精准编辑。该技术的核心在于使用融合了逆转录酶的Cas9 nickase（Cas9n-RT），在pegRNA引导下识别编辑位点，通过Cas9n在编辑位点产生单链切口，逆转录酶利用pegRNA的模板序列在单链切口位置合成新的DNA序列，从而实现精准的基因敲入。
▍Bingo™技术优势
▍Bingo™实验流程
▍Bingo™应用案例
| 细胞名称 | HCT116 |
|---|---|
| 基因 | EGFR（Gene ID: 1956） |
| 突变位点 | c.2319_2320 ins CAC |
SpacerGCCCAGCAGGCGGCACACGTG
| Bingo™ pegRNA | Spacer | GCCCAGCAGGCGGCACACGTG |
|---|---|---|
| Extension | GTGGACAACCCCCACcacGTGTGCCGC | |
| Bingo™ gRNA | GCACcacGTGTGCCGCCTGCT | |
• HCT116细胞EGFR基因敲入（c.2319_2320 ins CAC）多克隆细胞测序结果
CRISPR/HDR基因敲入
▍CRISPR/HDR技术原理
CRISPR/HDR是一种依靠CRISPR系统和细胞HDR修复机制实现基因敲入的基因编辑技术。sgRNA识别并结合目标基因位点，在Cas9核酸酶的作用下切割DNA双链，含同源臂的DNA供体模板在细胞HDR修复机制的作用下，整合至sgRNA切割位点中，实现精确的基因敲入。
▍CRISPR/HDR技术优势
▍CRISPR/HDR技术流程
▍FAQ
基因敲入在药物开发中的作用是什么?
基因敲入在药物开发中发挥了重要作用。它用于靶点验证，通过将特定基因敲入细胞系或动物模型中，确认药物靶点的有效性。它还能帮助建立疾病模型，测试药物在这些模型上的疗效和安全性。基因敲入技术还支持药物筛选，通过带有敲入基因的细胞系进行高通量筛选，发现潜在药物候选分子。此外，它还能揭示药物的作用机制，优化药物结构和用法。整体而言，基因敲入技术加速了药物研发过程，并提高了治疗效果和安全性。
基因敲入技术的核心原理是什么？
基因敲入技术是通过将外源基因序列插入到基因组的特定位置来实现基因功能研究或疾病治疗。艾迪基因利用先进的基因编辑工具，如CRISPR/Cas9系统，通过引导核酸酶切割目标DNA，并利用同源重组或非同源末端连接将外源基因准确插入指定位置，以实现高效且精确的基因敲入。
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